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Plate-forme : THERASSAY (Cardiex)
Ville : Nantes
Thématique : Animalerie, exploration fonctionnelle

 
Présentation et prestations de la plate-forme
THERASSAY est une plateforme d'exploration fonctionnelle des pathologies cardiovasculaires, métaboliques, musculaires, digestives, respiratoires, et cancéreuses du petit animal.
Elle fournit à des équipes académiques et industrielles les moyens et l'expertise pour analyser de nouvelles voies thérapeutiques depuis la validation de cibles d'intérêt jusqu'à l'évaluation de molécules en pharmacologie de sécurité.

THERASSAY propose :
- des prestations d'exploration fonctionnelle du petit animal
- une mise à disposition d'équipements et des formations
- des projets de R&D

Ces prestations sont organisées en 8 modules :
- Module 1 : Génération de modèles animaux
- Module 2 : Fonctions métaboliques
- Module 3 : Fonctions vasculaires
- Module 4 : Fonctions cardiaques
- Module 5 : Fonctions respiratoires
- Module 6 : Fonctions motrices
- Module 7 : Fonctions digestives et neuro-digestives
- Module 8 : Anti-tumoraux en cancérologie

Mots-clés : électrophysiologie, contractilité, signalisation, métabolisme, cancer, modèles animaux de pathologies humaines.

Présentation détaillée des modules :

Module 1 : Génération de modèles animaux
IRT-UN
- Extinction ou surexpression d'un gène par vectorisation ciblée d'ARN interférents ou d'ADN par dans le système cardiovasculaire, le muscle, le système pulmonaire , digestif et hépatique chez la souris.
Les services proposés vont de la conception et de la caractérisation de nano-vecteurs adaptés pour le transport de siRNA et d'ADN jusqu’à l’évaluation de leur efficacité et de leur innocuité dans des modèles cellulaires et animaux.

- Génération de modèles animaux de pathologies humaines.
Cette prestation fait intervenir des modèles de petits animaux sains ou mimant une pathologie humaine de dyslipidémie, de diabète, d’hypertension artérielle, de resténose ou bien encore de pathologies cardiaques, neuro digestive ou musculaire. Ces modèles s’appliquent à des animaux transgéniques ou non et permettent la mise en place de prestations de recherche pour le test de molécules d’intérêt thérapeutique.
exemples:
Modèle de dyslipidémie et de diabète(hypercholestérolémie, LDLr -/-, apoE-/-, syndrome métabolique,ob/ob, db/db, souris Streptozotocin )
Hypertension artérielle systémique (HTA) (L-NAME, Angiotensine II, sténose de l’artère rénal)
Modèle d'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP)(rat, souris)
Modèle de resténose intra-stent (rat, porc)
Modèle de choc septique (rat)
Modèle d'insuffisance cardiaque d'origine ischémique (rat)
Modèle de troubles progressifs de la conduction cardiaque (souris)
Modèle de cardiomyopathie dilatée (rat)
Asthme aigu et chronique induit par les acariens ou ovalbumine (souris)
Dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) (souris mdx)
Modèle d’atrophie musculaire (rat et souris)
Modèle de neurodégénération
Modèle de tumeurs


Module 2 : Evaluation des fonctions Métaboliques
Responsable : Cédric Le May
IRS-UN
Modèles in vivo :
- Rat, souris cobayes
Homéostasie des glucides :
phénotypage large d’un modèle au travers du diagnostique du diabète (type 1, type 2)
Les tests proposés:
Mesure de la glycémie (glucomètre) sur toute espèce.
Mesure de l’insulinémie (test RIA Mercodia) sur toute espèce
Test de tolérance au glucose (intraperitoneal, oral), sur souris. Test de sensibilité à l’insuline sur souris.

Homéostasie des lipides :
phénotypage large d’un modèle au travers de l’évaluation de la nature de la dyslipidémie (phypertriglycéridémie, hypercholestérolémie, profil des lipoprotéines…)
Les tests proposés:
Profils lipoprotéiques par FPLC sur toute espèce.
Dosages des lipides (cholestérol, triglycérides) et activités enzymatiques (CETP, MTP, lipases)
Mesure de l’absorption du cholestérol in vivo (souris)
Dosages des phytosterols et acides biliaires plasmatiques par GC/MS chez la souris, le cobaye.

Module 3 : Evaluation de la fonction vasculaire
Responsable : Gervaise Loirand
IRS-UN
Modèles in vivo :
- Rat, souris cobayes
Mesure de la pression artérielle systémique :
Pression systolique, pression diastolique, pression moyenne, fréquence cardiaque chez le rat et la souris :
-Anesthésié par isoflurane (cathétérisme)
-Vigile légèrement contraint (tail cuff, visitech 2000)
-Vigile (télémétrie Data sciences)
Mesure de la pression artérielle pulmonaire :
Animaux anesthésiés (cathétérisme)
Modèles Ex vivo :
Mesure de la fonction vasculaire ex-vivo :
Contractilité d’anneaux artériels (tension isométrique cuve à organes isolés de fibres intactes ou perméabilisées)
Fonction endothéliale (cuve à organes isolés)
Histologie, histomorphométrie, immunohistologie
Biochimie (expression et activation de protéines, immunoempreinte)
Modèles in vitro
- Cultures de cellules musculaires lisses vasculaires et endothéliales
Mesure des fonctions des cellules vasculaires in vitro :
Prolifération (BRDU, comptage cellulaire)
Migration (Imagerie sur test de la blessure et comptage sur chambre de Boyden)
Cytosquelelette d’actine (imagerie quantitative de fluorescence)



Module 4 : Evaluation de la fonction cardiaque
Responsable : Flavien Charpentier
IRS-UN
Modèles in vivo
- Souris, rats cobayes, lapins
Mesure de l'activité électrique
- ECG d'animaux vigiles (télémétrie, Data Sciences International)
- ECG d'animaux anesthésiés (isoflurane)
- exploration endocavitaire par cathétérisme d'animaux anesthésiés
Mesure de l'activité contractile
- pression intracardiaque (courbes pression-volume, avec sondes Millar) sur animaux anesthésiés (isoflurane)
Modèles ex vivo
- Tissus isolés perfusés : myocarde auriculaire et ventriculaire (souris, rat, cobaye, lapin), fibres de Purkinje (lapin), nœuds sinusal et auriculo-ventriculaire (lapin)
Mesure de l'activité électrique
- potentiels d'action par la technique des micro-électrodes intracellulaires
Mesure de l'activité contractile
- contraction de tissus myocardiques
- contraction de cœurs isolés perfusés (technique de Langendorff et cœur isolé travaillant, rat et lapin)
Modèles in vitro
- Cardiomyocytes isolés de souris, rat, cobaye et lapin
- lignées cellulaires transfectées stables et transitoires exprimer des canaux ioniques d'intérêt
Mesure de l'activité électrique (patch-clamp)
- potentiels d'action et courants ioniques de cardiomyocytes isolés
- caractérisation de canaux ioniques sur lignées cellulaires.
Mesure de l'activité contractile
- transitoires calciques (sondes fluorescentes) de cardiomyocytes isolés.


Module 5 : Evaluation de la fonction respiratoire
Responsable : Antoine Magnan
IRS-UN
Modèles in vivo
- Mesure des résistances des voies aériennes à l’aide d’un pléthysmographe (Emka) sur souris vigiles et non contraintes
- Mesure de la résistance et de la compliance pulmonaire par la méthode des oscillations forcées à l’aide d’un Flexivent (Scireq) sur souris anesthésiées et ventilées
- Tests pharmacologiques de molécules délivrées par aérosol in situ dans les bronches
Analyses in vitro:
- Analyse immunohistochimique et par cytométrie en flux des cellules des lavages broncho-alvéolaires
- Analyse du sang périphérique et des ganglions
- Analyse des modifications morphologiques évaluées sur des coupes de poumons



Module 6 : Evaluation de la fonction motrice
Responsable : Corinne Huchet-Cadiou
Faculté des Sciences
Modèles in vivo
- Souris, rats, cobayes (animaux sains, myopathes, dénervés ou âgés)
Exploration de la fonction motrice globale chez l’animal
- Mesure de force des membres chez l’animal vivant (2 et 4 pattes) : Grip test
- Mesure des activités de déplacements et de curiosité
- Exploration de l’endurance et de la résistance à l’effort : Test du rota-rod et du Wire test
Modèles ex vivo:Mesure de l'activité contractile musculaire
- sur animaux anesthésiés (pentobarbital)
- Muscles de la pattes postérieures perfusés : force musculaire globale d’une patte (ensemble de muscles)
- contraction de type twitch (stimulation par le nerf sciatique) : étude de la relation tension - voltage
- contraction de type tétanos stimulation par le nerf sciatique) : étude de la relation tension - fréquence
- Muscles isolés perfusés : muscle à contraction rapide extensor digitorum longus (edl) et muscle à contraction lente soleus (soléaire)
- contraction de type twitch (contraction liée à un potentiel d'action): étude de la relation tension - voltage
- contraction de type tétanos : étude de la relation tension - fréquence
- étude de la fatigue et de la récupération musculaire
Modèles in vitro: Atrophie et hypertrophie musculaires
- Poids des animaux et poids des muscles edl, soléaire et tibialis antérieur
Mesure de tension et homéostasie calcique
- Fibres musculaires squelettiques intactes isolés de muscles de souris et de rat.
- Muscles de type lent (soléaire) rapide (edl) et de diaphragme
- twitch, tétanos, contractures potassiques et contractures cafeiniques
- approche pharmacologique : essais de drogues
Mesure de tension maximale et de sensibilité aux ions divalents (Ca2+ et Sr2+)
- Fibres musculaires squelettiques perméabilisées de souris et de rat.
- Muscles de type lent (soléaire) rapide (edl) et de diaphragme


Module 7 : Evaluation des fonctions digestives et neuro-entériques
Responsable : Michel Neunlist
Faculté de Médecine
Modèles in vivo :
-Rat, souris
-Mesure de la perméabilité paracellulaire intestinale chez la souris
-Mesure de la vidange gastrique, du transit intestinal et du transit colique.

Modèles ex vivo :
-Mesure de l’activité contractile des segments musculaires circulaires et longitudinaux.
-Mesure de la modulation de l’activité contractile par l’activation du système nerveux entérique
-Mesure de la perméabilité paracellulaire et transcellulaire en chambre d’Ussing du tube digestif
-Mesure de la réponse inflammatoire

Modèles in vitro :
-Cultures primaires du système nerveux entérique (rat, souris).
-Lignée cellulaire de cellules gliales entériques, neuronales et épithéliales intestinales
-Modèle de co-culture cellules épithéliales / neuronales / gliales
-Mesure de l’impact des cellules gliales ou neuronales sur les fonctions de la barrière épithéliale (prolifération, différentiation, perméabilité, réparation, migration, réponse inflammatoire)
-Evaluation de la neuroprotection/toxicité dans le SNE.
-Evaluation de la régulation de neuromédiateurs / facteurs gliaux par facteurs environnementaux (nutritionnels, toxines, médiateurs) dans le SNE


Module 8 : Évaluation d'anti-tumoraux en cancérologie

- Evaluation de la toxicité aiguë et répétée de première intention sur souris saines
Variation pondérale, signe clinique, toxicité hématologique, examen macroscopique des organes

- Evaluation de l'efficacité antitumorale sur modèles murins de tumeurs
-Modèle syngénique de mélanome B16 ( tumeur sous cutanée, modèle de métastases pulmonaires ou hépatiques)
- Modèle de xénogreffe de cellules tumorales humaines sur souris immunodéprimées , en sous cutanée ou orthotopique ( lignées coliques HCT116, HT29, LS174T, lignée prostatique PC3, lignées mammaires MCF7, MDA435, MDA321)
- Modèles bioluminescents de tumeur orthotopique ( HCT116-luc, PC3-luc, MDA435-luc) permettant le suivi de la progression tumorale in vivo sur l'imageur BIOSPACE

-Développement à façon de modèle murin de tumeur
Autres éléments
Certification ISO 9001non
Site web de la plate-formehttp://www.therassay.com/
Structure(s) de rattachementInserm UMR1087
Réseaux auxquels participe la plate-forme-ProVasc: projet regional
-Real2 : projet régional
-EuTrigTreat : projet européen
-GDR CNRS 2823 : Découverte de molécules d\'intérêt thérapeutique ciblant les facteurs d\'échanges de petites prot
Moyens et équipements de la plate-forme
Les petits animaux sont hébergés au sein de l’unité Thérapeutique Expérimentale de l'IRS-UN (Agrément BP44015) en salle à rythme jour/nuit 12h/12h et thermostatée (19°c). Anesthésie gazeuse (isofluorane), manipulations sur place.

6 postes de culture cellulaire + 1 incubateur Tri-gaz pour culture cellulaire (hypoxie)
5 postes de dissection/chirurgie (loupe, anesthésie)
3 postes d’imagerie de fluorescence + 1 poste de microscopie inversée
1 caisson hypobar (hypoxie chronique rats et souris)
1 luminex


Module 1 :Génération de modèles animaux
Zetasizer (Malverne), Luminomètre (Wallac) et molécules organiques servant de vecteurs.

Module 2 : Evaluation des fonctions métaboliques
FPLC : FPLC@System à colonnes superose 6HR 10/30, 2 colonnes en série.
Glucomètres : Accu-Chek Go et One Touch Ultra + bandelettes réactives.
Cages métaboliques (x6) (air expirée)


Module 3 : Evaluation des fonctions vasculaires
2 équipements de Télémétrie (DSI) 12 récepteurs (implants pour souris et rats)
2 systèmes Tail cuff (visitech 2000) (2 postes 4 souris et un poste 4 rats )
2 postes de mesure invasive de la pression artérielle (HP) (sondes Millard)
3 robots de mesure de la contractilité par cuves à organes isolés (3X8) Phymep et EMKA (2000,2002)
1 robot de mesure de la contractilité des microvaisseaux (1x4) Danish Myo Tech
1 système de mesure de la contractilité sur fibre musculaire perméabilisée
3 postes complets de dissection/chirurgie (loupe, anesthésie isoflurane)
Imagerie de fluorescence 1 (Nikon Eclipse 600+ camera cool snap+ logiciel métamorphe)
Imagerie de fluorescence 2 (Nikon diaphot).
1 poste culture cellulaire ( 1 hotte, 2 incubateurs dont 1 tri-gaz [hypoxie])
Xcelligence

Module 4 : Evaluation des fonctions cardiaques
Echocardiographie doppler General electric VIVID7 (2008)
Télémétrie : 16 récepteurs. Implants pour souris, rats, cobayes et lapins.
ECG 6 dérivations sous anesthésie : 2 postes
Exploration endocavitaire (enregistrement-stimulation) : 1 poste
Mesure de pression : 1 poste
Micro-électrodes intracellulaires : 2 postes
Patch-clamp : 3 postes (2002,2004)
Cœur isolé perfusé et coeur isolé travaillant
Contraction sur trabécules cardiaques isolés : 2 postes
Raccourcissement cellulaire : 1 poste
Transitoires calciques : 1 poste
MEA (mesure de conduction)
CellOPTIQ

Module 5 : Evaluation des fonctions respiratoires
Pléthysmographe (Emka) à 8 chambres:analyse des résistances des voies aériennes chez la souris vigile, non contrainte
Flexivent (Scireq):analyse de résistances et de compliances pulmonaires par la méthode des oscillations forcées chez la souris anesthésiée et contrainte


Module 6 : Evaluation des fonctions motrices
1 équipement de mesure de force : grip test BIOSEB (pour souris et rats)
1 poste de mesure d’activité de déplacements (1 poste 2 souris)
2 postes de mesure de curiosité (2 postes 2 souris)
1 poste de mesure d’endurance et de résistance à l’effort (1 poste 4 et 1 souris)
1 poste de dissection/chirurgie (loupe, anesthésie)
2 systèmes de mesure de la contraction sur muscle isolé ex vivo Phymep (Logiciel Chart)
1 système de mesure de la contraction sur fibre isolée capteur de microdeplacement (Kaman)
2 systèmes de mesure de la contraction sur fibres perméabilisées capteur de microdeplacement (Kaman)

Module 7 : Evaluation des fonctions Digestives et neuroentériques
2 postes de culture cellulaire
2 postes d’imagerie de fluorescence
1 poste de mesure de contractilité (1x 6 chambres)
1 poste de mesure de perméabilité (1x 4 chambre d’Ussing)

Module 8 : Cancérologie
Biospace imageur
Coordonnées et contact sur la plate-forme
Nom Plate-FormeTHERASSAY (Cardiex)
Responsable ScientifiqueCHARPENTIER Flavien
Responsable TechniqueCHETIVEAUX Maud
Adresse PostalePlate-forme THERASSAY
IRS-UN
l'institut du thorax - UMR 1087
8 quai Moncousu
BP 70721
44007 Nantes
Site web de la plate-formehttp://www.therassay.com/
Contacter le responsable de la plate-forme

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