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High Throughput MAb Development
Responsable : Pascale GALEA • Responsable Tech. : Laetitia RUBRECHT, 100% Emilie Du Paty, 100%
Adresse : BIO-RAD
Cap DELTA
1682 Rue de la Valsière
CS61003
34184 Montpellier

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

Pas de site web.

Presentation de la plate-forme

Offre de prestation de la plateforme HT-MAb: developpement d'anticorps monoclonaux

Phase I : Planification stratégique pour élaborer le cahier des charges avec l’équipe projet

Phase II : Immunisation des souris
•En standard : 3 souris (souches à définir avec équipe projet)/cible ; 3 injections/souris + 1 boost pré-fusion
•Prélèvement des sérums et évaluation des titres par ELISA après injections 2 et 3
•choix de 1 ou 2 souris/cible pour la fusion

Phase III : Fusion et criblages des hybridomes
- fusion robotisée
•répartition des cellules fusionnées sur 20 plaques 96 puits
•Culture en milieu sélectif pendant 15 jours

-screening primaire à haut débit de tous les clones par ELISA P384w (differents formats) ou sur lame de verre - Sélection de au plus 96 clones positifs/cible
•Criblage de confirmation des puits positifs par ELISA (differents formats) ou autres techniques relevantes pour l'utilisation finale des clones
•Amplification (jusqu'à 48 clones, congélation 2 ampoules, 10 ml surnageant)
- Transfert à l’équipe projet de 10ml de surnageant/clone pour tests préliminaires

- Criblage secondaire des hybridomes d’intérêt (pour la sélection des 20 clones qui partiront en sous clonage) par ELISA (sensibilité, spécificité) et/ou SPR (ProteOnXP36) pour étude d’affinité en première évaluation et/ou epitope mapping

Phase IV : Sous-clonage de au plus 20 clones/cible
- Au plus 2 sous-clonages en dilution limite (1 plaque 96 puits/clone)
- Screening par ELISA et confirmation en format pertinent pour l'utilisation finale des anticorps
- Sélection de 2 sous-clones/clone (total 20 sous-clones)
- Isotypage
- 50ml de surnageant
- Congélation de 5 ampoules/sous clones
- Transfert à l’équipe projet de 50ml de surnageant/clone pour tests préliminaires

Phase V : labscale production et étude de stabilité pour au plus 10 clones
- Production de 150ml de surnageant concentré
- Purification des anticorps par chromatographie d’affinité (1-3mg, 95%pureté; test ELISA + Gel SDS)
- En option si le clone a une vocation industrielle, étude de stabilité de sécrétion à 6 et 8 semaines de culture
- Transfert à l’équipe projet des anticorps purifiés pour tests dans format final (liquide biologique)

Phase V Rapport final
A l’issu du projet, un rapport final de l’étude ainsi qu’une fiche d’identité des clones sera adressé à l’équipe projet.

Moyens et equipements

1- Animalerie A2 (jusqu’à 500 souris)
2- Pièces de culture cellulaire
3- Plate-forme robotisée de culture cellulaire dédiée à la sélection des anticorps monoclonaux.
4- Spotter + scanner pour puces à protéine
5- Akta purifier (8colonnes) pour purification des anticorps
6- ProteonXPR36 : étude des interactionS ligand/recepteur par SPR (36 interactions en simultanée)
7- Bioplex : analyse multiplexée d'interactions anticorps/antigène

Galerie

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