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NANOBODIES
Responsable : Daniel BATY, DR1 CNRS • Responsable Tech. : Elise TERMINE, IE1 INSERM (50%) Patrick CHAMES, CR1 CNRS (20%)
Adresse : Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille, CNRS UMR7258, Inserm U1068
Anticorps Therapeutiques et Immunociblage
Bat TRP2, entrée B
163 avenue de Luminy
Case 909
13288 Marseille Cedex 09
13009 Marseille

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

http://crcm.marseille.inserm.fr/spip.php...

Presentation de la plate-forme

Missions de la plate-forme :
La mission de la plateforme est de sélectionner et de cribler des anticorps à domaine unique et d’accompagner les équipes de recherche dans l’obtention de nanobodies d’intérêt.
La sélection et le criblage des nanobodies par la technologie du phage-display peuvent être réalisés sur protéines recombinantes, cellules transfectées, cellules de lignées intactes, extraits cellulaires, fractions membranaires, haptène couplés à des protéines...
Les nanobodies peuvent être produits dans E. coli avec différentes étiquettes (c-Myc, 6-His, Avitag, HA), avec une cystéine C-terminale permettant la fixation orientée sur nanoparticules.
Ils peuvent aussi être marqués spécifiquement en C-terminal par la BTG couplé à la “click-chemistry“.
Les gènes codant pour ces nanobodies peuvent aussi être fusionnés à des gènes codant pour des protéines fluorescentes (GFP, mRFP1,…). Ces constructions peuvent ainsi être directement exprimées dans le cytoplasme de cellules vivantes.

Service et accessibilité de la plate forme :
- Banques « homemade »
La plate-forme dispose déjà d’une trentaine de banques obtenues à partir d’animaux immunisés avec :
des protéines recombinantes,
des cellules humaines,
des biopsies de divers cancers,
des cellules spécifiquement transfectées avec un récepteur,
des haptènes, etc….


- Banques « à façon »
Après sélection de projets, la plateforme assure l’immunisation des lamas (en sous traitance) et la construction des banques permettant l’expression des nanobodies à la surface de bactériophage.

Elle accueille chercheurs, techniciens ou étudiants confirmés, pour réaliser les différentes étapes (sélection, criblage et production).

Moyens et equipements

Matériels acquis en 2009-2010 (sauf si renseigné)

Poste : Construction des banques de nanobodies à partir des lamas immunisés
4 postes de paillasses entièrement équipées pour la biologie moléculaire
1 paillasse d’électrophorèse ADN (entièrement équipée avec lecteur de gel ; Major Science)
1 paillasse d’électrophorèse pour protéines (entièrement équipée avec lecteur de gel (GelDoc EZ Image) et Trans Blot- Turbo))
2 appareils de PCR
1 centrifugeuse Megafuge 40R (multi rotor)
1 système d’analyse
2 étuves bactériologiques (30 et 37°C)
1 frigo/congélateur
1 congélateur -20°C
2 congélateurs -80°C (stockage des banques)

Poste : Sélection et criblage des nanobodies par phage-display
3 PSM
15 micro-incubateurs de microplaques
1 centrifugeuse 3SR+ (multi rotor) (acquis en 2013)
1 frigo
1 congélateur
1 centrifugeuse de paillasse

Poste : Biologie cellulaire (production des cellules pour criblage différentiel)
3 PSM
2 incubateurs CO2
1 microscope
1 compteur de cellules
1 centrifugeuse de paillasse
1 bain 37°C

Poste : Production, purification et validation des nanobodies
5 incubateurs agitateurs bactériologiques de type Infors
1 fermenteur de 15 litres (acquis en 2011)
1 centrifugeuse 6x1L (acquis en 2013)
1 système de filtration tangentielle Cogent micro-scale (acquis en 2013)
1 sprectro Tecan infinite M1000 (fluorescence, bioluminescence et HTRF)1 système de purification AKTA
1 robot Tecan (piqueur de cellules, Elisa, cytométrie) (acquis en 2016 ; 160k€
1 cytomètre couplé au robot Tecan (3 lasers, 10 couleurs) (acquis en 2016 ; 100k€
1 octet 96 red assay (157 k€ matériel demandé en cofinancement IbiSa 2016 ; 130k€)

Poste : Bureaux
6 bureaux équipés de PC pour l’accueil des personnes en formation

Galerie

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