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NanoToxCea
Responsable : Chevillard Sylvie et Ezan Eric • Responsable Tech. : Sylvie Chevillard
Adresse : Site 1: Eric Ezan SBTN - CEA- Marcoule - 30207 Bagnols Sur Céze
Autres sites:
Sylvie Chevillard IRCM - CEA- Fontenay aux roses
Marie Carrière SCIB/LAN - CEA Grenoble
30207 Bagnols sur Cèze

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

Pas de site web.

Presentation de la plate-forme

Evaluation in vitro de la toxicité des nanoparticules, au niveau cellulaire et moléculaire(Screening et évaluation de nano matériels industriels, classement des nanoparticules par dangerosité et approches mécanistiques).

Nota et justificatif du caractère multi-site de la plateforme:
Contrairement aux toxiques classiques (molécules organiques), l’évaluation de la toxicité des nanoparticules exige des savoir-faire en biophysique (spéciation, agrégation en milieu biologique, identification des protéines en interaction, stabilité de la couronne de protéines... ), en imagerie (visualisation des nanoparticules in cellulo), en biologie cellulaire et moléculaire(end-point de toxicité , hazard ranking et mécanismes) exigeant une étroite collaboration entre plusieurs partenaires . La spécificité de la plateforme repose donc sur la complémentarité de 3 équipes appartenant au CEA (Marcoule, Fontenay-aux-Roses, Grenoble) qui ont déjà une expérience et une réflexion avancée sur la Nano toxicologie dans le cadre de projets internes ou en collaboration.

Le savoir-faire proposé reposera sur les approches suivantes: les expositions aux nanomatériaux se feront sur des objets parfaitement caractérisés (au moins 7 paramètres physico-chimiques de la liste OCDE seront fournis par les physiciens du CEA). Nous travaillerons sur des lignées cellulaires humaines, représentant les principaux organes potentiellement exposés (poumon, intestin, foie, rein, lymphocytes, peau, (au moins deux lignées pour chaque organe). Dans le cadre d'une étude préalable, les cellules seront exposées à des gammes de doses et analysées en termes de survie cellulaire, métabolisme, prolifération, progression du cycle cellulaire. Dans le cadre d'une étude plus approfondie, analyse transcriptomique, protéomique associée à une analyse du stress oxydant, du potentiel membranaire mitochondrial, de l'activité oxydo-réductrice mitochondriale et de la génotoxicité consolideront les premières données. Tous les tests de toxicité seront interprétés en fonction de l'entrée et efflux des nanoparticules, évalués par Inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP/MS). Ensuite, l'interaction des nanoparticules avec les molécules biologiques cibles identifiées seront caractérisées par les méthodes biophysiques.

Moyens et equipements

Salles de culture pour cellules eucaryotes et procaryotes (niveau de sécurité 1 et 2).

Xcellingence (Roche) format 6xplaques de 96 puits)suivi en temps réel de la survie/prolifération cellulaire par impédencemétrie

Cell Sorter (FACS Calibur, BD bioscience)

Plateforme en Spectrométrie de masse (Maldi TOF Bruker et Orbitrap Thermo)

Plateforme en Microscopie à Force Atomique
Microscopie confocale

Equipements en biophysique:
Biacore (2000 et T200) et microcalorimétrie (VP-ITC et VP-DSC.
Spectroscopies: UV-vis et fluorescence (varian),de dichroisme circulaire (Jasco J-810). Diffusion dynamique de lumière (Malvern et Wyatt). Zeta potentiel (Malvern)
Analyse EC(Beckman)couplée ICP-MS (Agilent)

Equipements en purification des protéines et biomolécules (HPLC Agilent, FPLC GE Healthcare).

Plate-forme Agilent en transcriptomique (Scanner, four , Bioanalyzer, nanodrop) et qRT-PCR.

Plateforme de cytogénétique

Plateforme d'analyse des dommages de l'ADN: essai comet, micronoyau, immunomarquages des lésions, HPLC-MS-MS pour détection des dommages oxydatifs de l'ADN.

Galerie

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