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KISSf (Kinase Specialized Screening facility)
Responsable : Dr. Stéphane BACH • Responsable Tech. : Thomas ROBERT (50%)
Adresse : Kinase Inhibitor Specialized Screening facility
CNRS/Sorbonne Université#Station Biologique de Roscoff
Place Georges Teissier
CS 90074
29688 Roscoff cedex
France
29688 Roscoff

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

http://www.sb-roscoff.fr/fr/station-biol...

Presentation de la plate-forme

La plate-forme spécialisée de criblage d'inhibiteurs KISSf offre un service d'évaluation à moyen-débit de la bioactivité de composés chimiques.
En utilisant un panel sélectionné de protéines kinases, les analyses réalisées permettent d'évaluer les propriétés thérapeutiques de molécules d'intérêt. Les kinases ciblées interviennent dans des mécanismes cellulaires particuliers (notamment la mitose et la mort cellulaire programmée).

L'activité technique de KISSf se situe dans le domaine de la biologie et de la santé.

Les domaines d'application dépendent de la nature des kinases ciblées par notre plate-forme :
*Haspine et autres kinases mitotiques (PLK1, Aurora B), PIM1-2-3, CDK2/cyclin A; CDK9/ Cyclin T, et une sélection de tyrosine kinase d'intérêt (ABL1, PDGFR, KIT) pour le cancer ;
*JAK3 pour les pathologies inflammatoires;
*CDK5/p25, CK1e, et GSK-3b pour les troubles neurodégénératifs;
*RIPK3 pour les pathologies liées à la mort cellulaire nécroptotique ;
*LmCK1 & LdTLK pour les maladies parasitaires telles la leishmaniose (dans ce cadre des criblages parallèles sont possibles afin d'évaluer la spécificité d'inhibition des kinases parasitaires vs humaines).

Moyens et equipements

La réalisation des tests de mesure d'activité des kinases est automatisée. La préparation des composés à tester à deux concentrations (criblage primaire) ou à une gamme de concentrations (IC50) et la distribution des différents réactifs permettant le dosage d'activité sont effectuées à l’aide de robots de distribution, JANUS Expanded (varispan 8 aiguilles et tête 96 canaux) et Janus Mini (varispan 8 aiguilles) de PerkinElmer.
La révélation des réactions est réalisée par la méthode bioluminescente ADP-Glo (Promega) permettant de doser la consommation d'ATP utilisé lors des réactions enzymatiques. La lecture des plaques (détection de la luminescence émise par la réaction) est réalisée à l'aide du lecteur EnVision (PerkinElmer). Les données sont analysées et traitées grâce au logiciel GraphPad PRISM6.

Par ailleurs, l'acquisition en 2016 d'un système de chromatographie AKTA Start et d'un caisson de réfrigération 4°C nous a permis d'automatiser la méthode de purification des protéines recombinantes, de standardiser et d'améliorer nos méthodes de production de cibles enzymatiques, ainsi que de développer et d'élargir notre panel de cibles kinases proposé.

Nous disposons également d'un robot à tête 96 canaux (Nimbus, Hamilton) nous permettant d'effectuer des tests de prolifération cellulaire ainsi que des tests de nécroptose.

Dernières acquisitions (en cours de développement):
(i) IncuCyte (novembre 2017, Essen bioscience, Sartorius) qui nous permet de suivre le devenir des cellules en temps réel;
(ii) Microscale thermophoresis, deux lecteurs permettant la réalisation d'expériences de thermophorèse (avril 2018, Nanotemper, Münich, Allemagne) afin de caractériser les interactions entre les molécules hits de criblage et leur cible thérapeutique (détermination de constantes d'affinité, Kd).

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