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Imagerie-Gif/Plate-Forme Cytometrie
Responsable : B. Satiat-Jeunemaitre/Mickael Bourge • Responsable Tech. : Mickael Bourge
Adresse : I2BC, 1 Avenue de la Terrasse
91198 Gif sur Yvette

complements

Certifications

  

Site web

http://www.i2bc.paris-saclay.fr/spip.php...

Presentation de la plate-forme

(Ce paragraphe ne concerne que les spécifités de la plate-forme de Cytometrie).

Les activités de la plate-forme se déclinent autour de trois axes majeurs : R&D, Formation, Prestations.
Parmi les activités courantes du service en Prestations , citons entre autres:
- le dosage de la quantité d’ADN nucléaire en vue de l’étude de cycles cellulaires et d’endoréplication.
- le dosage d’ADN à des fins de recherche en écologie et systématique, et d’amélioration des variétés (analyse de ploïdies).
- le suivi de l’activité génique par l’expression d’un gène rapporteur (tel que celui de la Green Fluorescent Protein-GFP ou autres protéines fluorescentes).
- des mesures d’activités métaboliques de la cellule : dosage de calcium, pH, potentiel membranaire, poussées oxydatives, glutathion...
- des analyses immunologiques.
- le tri de cellules animales, de levures, de bactéries, de protoplastes et d’organites cellulaires.

Les projets R & D portent sur l'établissement de protocoles de pulse-chase in cellulo , des protocoles de tri d'éléments subcellulaires, et la caracterisation de nouvelles sondes fluorescentes

Les utilisateurs de la plateforme de Cytométrie en Flux s’appuient sur l’expertise de l’ingénieur attaché à la plate-forme pour monter leurs expériences et pour se former à l’utilisation des équipements.

Moyens et equipements

Ce paragraphe ne décrit que les équipements majeurs de la plate-forme de Cytométrie

1. Cytomètre Analyseur CyFlow SL (Partec-Sysmex) (2006)

Ce CyFlow SL3 est équipé d’un laser diode 532 nm 30 mW, de détecteurs Forward- et Side-scatter, de deux canaux de fluorescence rouge (Band Pass 630/30 nm, Long Pass 590 nm) et permet un comptage volumétrique absolu. Ce cytomètre économe, convivial et intuitif permet une formation rapide pour les utilisateurs qui souhaitent travailler de manière autonome.
Il est principalement utiliser pour des études de cycle cellulaire, endoréplication, ploïdie et taille de génome.

2. Cytomètre Analyseur-Trieur MoFlo ASTRIOS (Beckman-Coulter)

Ce cytomètre en flux apporte la technologie et la puissance nécessaire pour la lecture simultanée de plus de 20 paramètres de fluorescence et pour le tri d’évènements, même s’ils sont rares, dans une population d’objets hétérogènes. Il est muni de 22 photomultiplicateurs, et de 5 raies lasers (355 nm /100 mW ; 405 nm / 50 mW ; 488 nm / 100 mW ; 561 nm / 200 mW ; 640 nm / 60mW). Le tri stérile peut être accompli selon six voies (récolte dans des tubes 5ml ou eppendorf) ou sur plaque (6 à plus de 96 puits) avec une vitesse de lecture de 70 000 évènements par seconde. L’analyseur-trieur bénéficie depuis janvier 2015 d’un module permettant de détecter des évènements de petite taille (<200 nm).

- PF Microscopie photonique : Observations possibles des évènements fluorescents analysés/triés par cytométrie de flux sur un parc d'une dizaine d'équipements (champ large, confocal, superresolution)
-PF Microscopie électronique : traitement des évènements fluorescents analysés/triés par cytométrie de flux en microscopie electronique en transmission (2 MET, laboratoire de preparation des echantillons associé)

Galerie

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