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PRIMACEN
Responsable : Dr Hubert Vaudry • Responsable Tech. : Dr Ludovic Galas
Adresse : Plate-forme régionale de Recherche en IMAgerie CEllulaire de haute-Normandie (PRIMACEN),Institut Fédératif de Recherches Multidisciplinaires sur les Peptides (IFRMP 23), Place Emile Blondel, Faculté des Sciences, Université de Rouen
76821 Mont-Saint-Aignan

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

http://primacen.crihan.fr

Presentation de la plate-forme

La Plate-forme régionale de Recherche en IMAgerie CEllulaire de haute-Normandie (PRIMACEN) regroupe six services qui couvrent un large spectre d’activités dans le domaine de l’imagerie cellulaire depuis la synthèse de biomarqueurs et la préparation des échantillons jusqu’à la localisation et la détermination de l’activité biologique d’une molécule d’intérêt. Les offres relatives à chacun des services concernent les champs d’application suivants :

•service de synthèse de peptides et de biomarqueurs : conception, synthèse, purification, analyse et caractérisation de peptides, analogues peptidiques et biomarqueurs.
Responsable : Dr Jérome Leprince (CR1 Inserm)
Acteur : Benjamin Lefranc (IE Université de Rouen, CDD)
Les études menées à partir des équipements du service de synthèse de peptides et de biomarqueurs consistent en la synthèse, la purification, l’analyse et la caractérisation de peptides, analogues peptidiques ou biomarqueurs (fluorescents, biotinylés, radioiodés,…). Les activités du service répondent à toutes les demandes des équipes de l’IFRMP23 et des clients extérieurs en matière de biomarqueurs comme par exemple la fourniture de peptides et pseudo-peptides d’intérêt y compris la synthèse d’antigènes permettant le développement d’anticorps qui sont utilisés pour l’imagerie par immunohistochimie. Les prestations du service couvrent également le domaine d’application de la spectrométrie de masse MALDI-TOF pour l’analyse de peptides naturels contenus dans des échantillons biologiques et la protéomique par exemple. Le service est à même de synthétiser des peptides naturels, de concevoir et synthétiser des peptides modifiés (analogues stables, peptides biotinylés, peptides fluorescents, peptides marqués à l’iode 125…), des pseudopeptides et des peptidomimétiques, de les purifier, de les caractériser, et de les conditionner à des fins de recherche académique ou privée à l’exclusion des protocoles d’administration chez l’Homme.

•service de criblage de molécules bioactives : identification de molécules bioactives et détermination de l’activité biologique de molécules naturelles ou de synthèse par spectrofluorimétrie.
Responsable : Dr Christophe Dubessy (MCU, Université de Rouen)
Acteur : Dr Olivier Wurtz (MCU, Université de Rouen), Dr Bruno Gonzalez (DR2 Inserm).
Les études menées à partir des équipements du service de criblage de molécules bioactives consistent à identifier des molécules bioactives et à déterminer l’activité biologique de molécules naturelles ou de synthèse. Les tests sont effectués sur des cultures de lignées cellulaires et des cultures primaires par des techniques de spectrofluorimétrie. Les tests biologiques proposés sont par exemple la mesure de variations de flux ioniques, de [Ca2+]i, d’AMPc, de pH, de potentiel membranaire, d’activités enzymatiques ou encore de survie cellulaire. Ils sont réalisés par des approches à faible et moyen débit, soit au niveau d’une cellule unique soit au niveau d’une population cellulaire, en fonction du nombre d’échantillons à analyser et du type de problème à résoudre.

•service de microscopie conventionnelle et autoradiographie : localisation de molécules d’intérêt (neuropeptides, neurotransmetteurs, récepteurs, protéines, enzymes…) par immunohistochimie, d’ARNm par hybridation in situ, et de sites de liaison (radioliaison).
Responsable : Dr Ludovic Galas (IR2 Inserm, RIO)
Acteurs : Dr Delphine Burel (MCU, Université de Rouen), Dr Sylvie Jégou (CR1 Inserm).
Les études menées à partir des équipements du service de microscopie conventionnelle et autoradiographie consistent en la localisation de molécules d’intérêt (neurotransmetteurs, neuropeptides, récepteurs, protéines, enzymes…), d’ARNm et de sites de liaison (binding). La localisation des molécules d’intérêt est réalisée par immunohistochimie en utilisant des fluorophores ou chromophores en microscopie à champ large. La localisation d’ARNm est réalisée en macro- et micro-autoradiographie par la technique d’hybridation in situ avec des sondes nucléotidiques radioactives (35S) ou froides (digoxigénine, biotine…). La localisation de sites de liaison est réalisée par autoradiographie en utilisant des ligands radioactifs (3H ou 125I). Les échantillons biologiques traités dans le service concernent les tissus et cellules d’origine végétale, animale ou humaine.

•service de microscopie confocale et vidéomicroscopie : localisation de molécules d’intérêt (protéines, neuropeptides neurotransmetteurs, récepteurs, enzymes…) dans des bactéries, des cellules végétales, animales et humaines, et étude spatio-temporelle des processus biologiques sur des cellules et tissus vivants.
Responsable : Dr Ludovic Galas (IR2 Inserm, RIO)
Co-responsable : Dr Magalie Bénard (IE2 Inserm RIO)
Acteurs : Mr Damien Schapman (IE CDD Inserm), Dr Jean-Luc Do-Régo (IR2 Inserm).
Les études menées à partir des équipements du service de microscopie confocale et vidéomicroscopie concernent (i) la localisation par immunohistochimie de molécules d’intérêt (protéines, neuropeptides neurotransmetteurs, récepteurs, enzymes…) au sein de tissus et cellules fixés et (ii) la localisation, grâce à des protéines de fusion ou des colorants vitaux, de ces molécules sur des tissus et cellules vivants. Cette dernière approche rend possible l’étude spatio-temporelle des processus biologiques comme les variations de [Ca2+]i, d’AMPc, de potentiel membranaire, de pH, d’activités enzymatiques ou encore l’étude de la survie cellulaire, du trafic membranaire, de la migration cellulaire et de l’interaction entre molécules par les techniques de FLIM et de FRET. L’analyse d’images par des logiciels de post-acquisition permet notamment la reconstruction 3D après déconvolution.

•service de microscopie électronique : localisation et identification à l’échelle subcellulaire de molécules d’intérêt (épitopes de nature protéique ou glucidique) par immunocytochimie dans des cellules humaines, animales végétales et bactériennes.
Responsable : Pr Azeddine Driouich (PU, Université de Rouen)
Co-responsables : Sophie Bernard (IE2 Université de Rouen)
Acteurs : Dr Marie-Laure Follet-Gueye (MCU, Université de Rouen)
Les études menées à partir des équipements du service de microscopie électronique concernent la localisation et l’identification à l’échelle subcellulaire de molécules d’intérêt (épitopes de nature protéique ou glucidique) par immunocytochimie dans des cellules humaines, animales, végétales et bactériennes. Les échantillons biologiques destinés à la microscopie électronique à transmission nécessitent une préparation spécifique qui est réalisée au sein du service selon les techniques conventionnelles (fixation chimique, déshydratation et inclusion en résine) ou selon de nouvelles techniques (cryométhodes à haute pression) destinées à améliorer la préservation ultrastructurale et notamment celle des antigènes pour optimiser leur détection. Les coupes semi-fines et ultrafines sont réalisées à température ambiante par ultramicrotomie ou à froid par cryo-ultramicrotomie puis l’analyse ultrastructurale des échantillons est effectuée au microscope électronique à transmission.

•service de microdissection et de PCR quantitative : microchirurgie, prélèvements d’échantillons puis quantification de l’expression relative de gènes exprimés dans différents tissus ou dans des cellules en culture.
Responsable : Dr David Vaudry (CR1 Inserm)
Co-responsable : Dr Magalie Bénard (IE2 Inserm, RIO)
Acteurs : Dr Magali Basille Dugay (IE2 Université de Rouen), Dr Jean-Luc Do-Régo (IE2 Inserm), Donovan Liot (AI Université de Rouen), Colas Calbrix (Ai Université de Rouen).
Les études menées à partir des équipements du service de microdissection et de PCR quantitative consistent à quantifier l’expression relative de gènes d’intérêt dans différents tissus ou dans des cellules en culture. Les appareils disponibles permettent de réaliser des interventions chirurgicales pour traiter les animaux puis la découpe fine de structures d’intérêt dans des tissus par microchirurgie ou par microdissection laser. Le service propose aussi l’extraction automatisée des ARN, la distribution robotisée des plaques de PCR quantitative et l’analyse par PCR quantitative.

Moyens et equipements

Service de synthèse de peptides et de biomarqueurs :
4 Synthétiseurs de peptides (1996, 2006,2010), 4 HPLC Gilson (1999, 2007, 2010), 3 lyophilisateurs (1998, 2001, 2011) et spectromètre de masse MALDI-TOF (2003).

Service de criblage de molécules bioactives
Flexstation III Molecular device (2010), lecteurs de plaques Biotek et Perkin Elmer (2000, 2007) et cytomètre de flux Beckman Dickinson (1999).

Service de microscopie conventionnelle et autoradiographie :
Système d’analyse d’images Explora Nova/Nikon (2002, 2006), système d’analyse d’images SAMBA pour l’autoradiographie (2002), phosphorimageur STORM Amersham (2000), Système d’analyse d’image Imaris (2007), macroscope Leica (2005).

Service de microscopie confocale et vidéomicroscopie :
Microscope confocal droit SP2 AOBS Leica, (2002), Microscope confocal inversé SP2 AOBS avec de chaîne de laser multiphotonique et module FLIM (2003), Microscope confocal inversé SP5 X avec laser blanc et module TIRF multicouleurs (2008), Macroscope confocal LSI (2009), vidéomicroscopes Leica/Metamorph avec module de déconvolution (2001, 2003), Biostation Nikon (2009), Cell Vizio 488 (2009), microfluorimètre dédié à la détection de sondes calciques ratiomètriques Nikon (1997), laboratoire L2 (2008).

Service de microscopie électronique
Microscope électronique FEI avec dispositif de fixation à haute-pression (2000), 1 système de substitution à froid (2003), 2 ultracryomicrotomes Leica (2000, 2008), évaporateur de carbone (2004), 1 knife maker Leica (2000), 1 automate pour l'immunogold Leica (2004).

Service de microdissection laser et Q-PCR :
4 Cryotomes REICHERT-JUNG, LEICA (1994, 1997, 2001, 2007 et 2008), 2 Vibratomes LEICA (1999), Microdissecteur laser PALM/Zeiss (2005, 2009), 3 Appareils PCR quantitative (2007, 2011), Robot Eppendorf (2004), appareil de PCR (2005), équipements pour la chirurgie (2005, 2007, 2008).

Galerie

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