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Unité Technologique et de Service
Responsable : Dr. Bernard DELMAS • Responsable Tech. : Pierre LAFAYE Patrick ENGLAND Bertrand RAYNAL Ahmed HAOUZ Stéphane PETRES Jacques BELLALOU
Adresse : Institut Pasteur
25-28 rue du Dr Roux
75724 Paris

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

http://citech.pasteur.fr

Presentation de la plate-forme

L'Unité Technologique et de Service (UTechS) "Protéines" intègre un ensemble très complet de technologies et d'expertises pour l'analyse des macromolécules biologiques et en particulier des protéines. Du fait de sa localisation à l'Institut Pasteur, les agents pathogènes et la réponse de l'hôte à l'infection constituent des systèmes biologiques importants pour la plate-forme. Néanmoins, la plate-forme est ouverte à toute autre thématique et collabore largement avec la communauté scientifique française et étrangère.

L'UTechS "Protéines" propose des services à haute valeur ajoutée dans 4 axes méthodologiques:

A. Production de protéines recombinantes dans des micro-organismes (procaryotes et eucaryotes) et dans des lignées cellulaires (insectes et mammifères):
1. Optimisation des conditions de production: constructions génétiques, systèmes d'expression (Escherichia coli, Lactococcus lactis, Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Mycobacterium smegmati , Leishmania tarentolae, Spodoptera frugiperda, lignées cellulaires S2 de Drosophile, cellules de mammifères (HEK293, hybridomes, …)), procédés de culture (échelle micro-plaques ou batterie de multi-microfermenteurs), ...
2. Culture à plus grande échelle en fermenteurs (jusqu'à 20 litres) et en bioréacteurs à usage unique (jusqu'à 25 litres).
3. Purification de protéines à échelle préparative

B. Production d'anticorps monoclonaux et recombinants
1. Production, purification et caractérisation d'anticorps monoclonaux murins (isotypage, mesure d'affinité, cartographie épitopique)
2. Développement de tests d'immunodiagnostic sur bandelettes
3. sélection et production de nano-anticorps homodimériques simple-chaîne de camélidés (VHH).

C. Caractérisation biophysique à l'échelle moléculaire de macromolécules et de leurs interactions
1. Caractérisation hydrodynamique de la taille, la forme et l'architecture des macromolécules biologiques et de leurs assemblages, par ultracentrifugation analytique (AUC), diffusion dynamique de la lumière (DLS), et diffusion statique de la lumière/viscosimétrie (SEC-LS°.
2. Caractérisation spectroscopique du repliement, de la dynamique et de la stabilité des macromolécules, par dichroïsme circulaire (CD), spectroscopie de fluorescence à l’état stationnaire ou résolue en temps, et spectroscopie infra-rouge (FTIR)
3. Caractérisation thermodynamique et cinétique des interactions moléculaires et des modifications conformationnelles associées, par microcalorimétrie DSC et ITC, résonance plasmonique de surface (SPR), interférométrie de bio-couche (BLI), interférométrie à double polarisation (DPI) et micro-thermophorèse (MST).

D. Cristallogénèse et détermination de la structure atomique de macromolécules biologiques par diffraction des rayons X
1. Cristallogenèse à haut débit: criblage robotisé des conditions de cristallisation (plus de 1440 conditions); optimisation de la qualité des cristaux; stockage et visualisation des plaques de cristallisation ; fabrication robotisée de solutions de cristallisation à façon (plus de 300 solutions mères)
2. Contrôle qualité des cristaux par diffraction des rayons X et détermination de la structure tridimensionnelle: criblage de cristaux et acquisition de données de diffraction; stockage et analyse de données cristallographiques

Moyens et equipements

Grands équipements:

*Production de protéines en procaryote:
- Plate-forme robotique Evo (Tecan) (2014)

*Biophysique:
- Biosenseurs microfluidiques à résonance plasmonique de surface: Biacore T200 (Biacore-GE Healthcare) (2014) et ProteOn XPR36 (BioRad) (2008)
- Appareil d'interférométrie à double polarisation Analight 4D (Farfield-Biolin) (2011)
- Appareil d'interférométrie de bio-couche Octet RED384 (Pall-ForteBio) (2015)
- Appareils de micro-thermophorèse NT.LabelFree et NT.115 (NanoTemper) (2014-2015)
- Spectropolarimètre de dichroïsme circulaire Aviv 215 (2004)
- Appareil de diffusion dynamique de la lumière en format microplaque DynaPro DLS Plate Reader (Wyatt) (2009)
- Détecteur de diffusion statique de la lumière/viscosimétrie couplé à un système de chromatographie d'exclusion stérique TDA302/GPCmax (Viscotek-Malvern) (2006)
- Microcalorimètres de titration isotherme VP-ITC et ITC200(MicroCal-Malvern) (2005 et 2010) et à balayage de température VPcapDSC (Microcal-Malvern) (2013)
- Spectrofluorimètre QuantaMaster QM4CW doté d’un système Laser Strobe de détection de durée de vie de fluorescence (Photon Technology International) (2009)
- Système de mélange rapide à détection de fluorescence (« stopped-flow ») KinetAsyst SF61-DX2 (TgK Scientific) (1996)
- Ultracentrifugeuses analytiques Optima XL-A (Beckman-Coulter) (1993) et ProteomeLab XL-I (Beckman-Coulter)(2005)

*Biologie structurale

Cristallogenèse:
- Robots de cristallogenèse en nano-volumes Cartesian nanodispenser (Genomic Solutions)(2003), Mosquito (TTP Labtech) (2009) et Dragonfly (TTP Labtech) (2014)
- Robot pour la fabrication à façon des solutions de cristallisation MatrixMaker (Emerald BioSystem) (2006)
- Robot de stockage et visualisation automatique des plaques de cristallisation RockImager (Formulatrix)(2009)


Diffraction des rayons X : générateur à anode tournant Micromax-07 (Rigaku), équipé de miroirs (Osmic Blue-2), de détecteurs Image Plate (MARresearch dtb) et de systèmes cryogéniques (Oxford Cryosystems) (2004)

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