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Pasteur Proteopole
Responsable : Dr. Patrick ENGLAND • Responsable Tech. : Patrick ENGLAND Ahmed HAOUZ Pierre LAFAYE Stéphane PETRES Bertrand RAYNAL
Adresse : Institut Pasteur
25-28 rue du Dr Roux
75724 Paris

complements

Certifications

Pas de certification ISO

Site web

https://research.pasteur.fr/en/center/ce...

Presentation de la plate-forme

Pasteur Proteopole intègre un ensemble très complet de technologies et d'expertises pour la production et l'analyse des macromolécules biologiques, en particulier des protéines. Du fait de sa localisation à l'Institut Pasteur, les agents pathogènes et la réponse de l'hôte à l'infection constituent des systèmes biologiques importants pour la plate-forme. Néanmoins, la plate-forme est ouverte à toute autre thématique et collabore largement avec la communauté scientifique française et étrangère.

Pasteur Proteopole propose des services à haute valeur ajoutée dans 4 axes méthodologiques:

A. Production de protéines recombinantes dans des micro-organismes (procaryotes et eucaryotes) et dans des lignées cellulaires (insectes et mammifères):
1. Optimisation des conditions de production: constructions génétiques, systèmes d'expression (Escherichia coli, Lactococcus lactis, Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Mycobacterium smegmati , Leishmania tarentolae, Spodoptera frugiperda, lignées cellulaires S2 de Drosophile, cellules de mammifères (HEK293, hybridomes, …)), procédés de culture (échelle micro-plaques ou batterie de multi-microfermenteurs), ...
2. Culture à plus grande échelle en fermenteurs (jusqu'à 20 litres) et en bioréacteurs à usage unique (jusqu'à 25 litres).
3. Purification de protéines à échelle préparative

B. Production d’anticorps simple chaîne de camélidés (nanobodies ou VHHs)
1. sélection et production de nano-anticorps homodimériques simple-chaîne de camélidés (VHH).
2. Développement de tests d'immunodiagnostic sur bandelettes
3. Conjugaison de VHHs avec des fluorophores et agents de contraste

C. Caractérisation biophysique à l'échelle moléculaire de macromolécules et de leurs interactions
1. Contrôle qualité d'échantillons de protéines purifiés.
Caractérisation hydrodynamique de la taille, la forme et l'architecture des macromolécules biologiques et de leurs assemblages, par ultracentrifugation analytique (AUC), diffusion dynamique de la lumière (DLS), diffusion statique de la lumière (SEC-LS), diffusion des rayons X aux petits angles (SAXS) et viscosimétrie/diffusion de Taylor.
2. Caractérisation spectroscopique du repliement, de la dynamique et de la stabilité des macromolécules, par dichroïsme circulaire (CD), spectroscopie de fluorescence à l’état stationnaire ou résolue en temps, fluorescence différentielle à balayage (DSF) et spectroscopie infra-rouge (FTIR)
3. Caractérisation thermodynamique et cinétique des interactions moléculaires et des modifications conformationnelles associées, par microcalorimétrie DSC et ITC, résonance plasmonique de surface (SPR), interférométrie de bio-couche (BLI), et micro-thermophorèse (MST).

D. Cristallogénèse et détermination de la structure atomique de macromolécules biologiques par diffraction des rayons X
1. Cristallogenèse à haut débit: criblage robotisé des conditions de cristallisation (plus de 2200 conditions); optimisation de la qualité des cristaux; stockage et visualisation des plaques de cristallisation ; fabrication robotisée de solutions de cristallisation à façon (plus de 300 solutions mères)
2. Contrôle qualité des cristaux par diffraction des rayons X et détermination de la structure tridimensionnelle: criblage de cristaux et acquisition de données de diffraction
3. Stockage et analyse de données cristallographiques

Moyens et equipements

Grands équipements:

*Production de protéines:
- Plate-forme robotique Evo200 (Tecan) (2014)
- Automate d'électrophorèse capillaire LabChip GXII (Perkin Elmer) (2015)
- Station de travail AMBR15-24 (Sartorius) (2016)

*Biophysique Moléculaire:
- Biosenseur microfluidique à résonance plasmonique de surface: Biacore T200 (Biacore-GE Healthcare) (2014)
- Appareil d'interférométrie de bio-couche Octet RED384 (Pall-ForteBio) (2015)
- Appareils de micro-thermophorèse NT.LabelFree et NT.115 (NanoTemper) (2014-2015)
- Spectropolarimètre de dichroïsme circulaire Aviv 215 (2004)
- Appareil de diffusion dynamique de la lumière en format microplaque DynaPro DLS Plate Reader I (Wyatt) (2009)
- Détecteur de diffusion statique de la lumière couplé à un système de chromatographie d'exclusion stérique TDA302/GPCmax (Malvern Panalytical) (2006)
- Microcalorimètres de titration isotherme VP-ITC et ITC200(MicroCal-Malvern) (2005 et 2010) et à balayage de température VPcapDSC (Malvern Panalytical) (2013)
- Spectrofluorimètre QuantaMaster QM4CW doté d’un système Laser Strobe de détection de durée de vie de fluorescence (Photon Technology International) (2009)
- Système de mélange rapide à détection de fluorescence (« stopped-flow ») KinetAsyst SF61-DX2 (TgK Scientific) (1996)
- Fluorimètre différentiel à balayage Prometheus NT.48 (NanoTemper) (2016)
- Ultracentrifugeuses analytiques ProteomeLab XL-I (Beckman-Coulter)(2005) et OptimaAUC (Beckman-Coulter) (2018)
- Analyseur de dispersion de Taylor Viscosizer TD (Malvern Panalytical) (2016)
- Spectromètre de masse UltraFlextreme (Bruker) (2017)

*Cristallographie:

Cristallogenèse:
- Robots de cristallogenèse en nano-volumes Cartesian nanodispenser (Genomic Solutions)(2003), Mosquito (TTP Labtech) (2009) et Dragonfly (TTP Labtech) (2015)
- Robot pour la fabrication à façon des solutions de cristallisation MatrixMaker (Emerald BioSystem) (2006)
- Robot de stockage et visualisation automatique des plaques de cristallisation RockImager (Formulatrix)(2009)


Diffraction des rayons X : générateur à anode tournant Micromax-07 (Rigaku), équipé de miroirs (Osmic Blue-2), de détecteurs Image Plate (MARresearch dtb) et de systèmes cryogéniques (Oxford Cryosystems) (2004)

Galerie

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