AniRA

Un large éventail de services spécialisés autour de la souris : génération et maintien de lignées murines génétiquement modifiées, développement de modèles physiopathologiques infectieux et analyse phénotypique extensive.

Site de la plateforme

AniRA

Site de la plateforme

Ani-Rhône-Alpes (AniRA)

La plateforme AniRA est subdivisée en deux départements spécialisés. Le département AniRA-Mouse models est en charge de la génération et de la production de souris génétiquement modifiées, ainsi que de l'utilisation de modèles animaux infectieux. Il dispose d'une animalerie (AniRA-PBES) avec un service de transgénèse proposant des techniques actuelles d’édition du génome (CRISPR-Cas9), mais également des solutions à façon en lien avec les plateaux d'analyse génétique cellulaire (AniRA-AGC) et de vectorologie (AniRA-Vectorologie). L’animalerie dispose de zones confinées A1, A2 et A3. Un laboratoire de niveau 3 (AniRA-BSL3) complète la possibilité d'utiliser des modèles infectieux.

Le département AniRA-Phenotyping propose des prestations de phénotypage complètes et extensives : exploration du système immunitaire ou osseux (AniRA-ImmOs), étude des domaines métaboliques et cardiovasculaires (AniPhy), analyse de neurotransmetteurs (NeuroChem)… Il dispose également d'un plateau de cytométrie (AniRA-Cytométrie) doté d’instruments de pointe (CyTOF) et de l’expertise nécessaire à leur utilisation.

Expertises et services

Génération et maintien de lignées murines génétiquement modifiées (AniRA-PBES) :

Elevage et production de lignées murines EOPS (3000 cages),
Création de lignées mutantes par transgénèse, recombinaison, lentigénèse et ingénierie,
Mise à disposition de lignées et maintien dans des zones expérimentales de confinement A1, A2 ou A3 (2000 cages),
Décontamination de lignées par transfert aseptique d’embryons,
Cryopréservation de lignées (embryons, sperme, ovaires) et distribution.

Analyse génétique et vectorologie (AniRA-AGC, AniRA-Vectorologie) :

Génotypage par PCR,
Développement de projets utilisant la PCR quantitative,
Production de vecteurs rétro et lentiviraux pour cellules et transgénèse.

Réalisation de protocoles expérimentaux infectieux (AniRA-PBES, AniRA-BSL3) :

Réalisation de protocoles expérimentaux infectieux en milieu confiné de niveau 1 à 3,
Développement de nouveaux modèles de maladies infectieuses,
Développement de modèles murins humanisés pour l'étude de pathogènes humains,
Analyse des interactions des virus émergents avec leur vecteur (moustique) et leur hôte (animal et Homme).

Phénotypage du système immunitaire et osseux (AniRA-ImmOs, AniRA-Cytométrie) :

Immunophénotypage,
Utilisation de modèles physiopathologiques animaux validés,
Développement de tests multiparamétriques innovants,
Mise à disposition de matériel (micro-CT Scan) et formation,
Phénotypage osseux.

Phénotypage métabolique, cardiovasculaire, neurotransmetteurs (AniPhy, NeuroChem) :

Analyses du métabolisme et du système cardiovasculaire,
Etude du système nerveux autonome et musculaire,
Etude de neurotransmetteurs.

Moyens et équipements

Zones d’expérimentation A1, A2 et A3, avec PSM (AniRA-PBES),
Zone d’expérimentation L3 (AniRA-BSL3),
Luminex BioPlex 100 (AniRA-AGC),
Cytomètres en flux : analyseurs et trieurs (AniRA-Cytométrie),
Cytomètre de masse Fluidigm CyTOF 2 Helios (AniRA-Cytométrie),
Cytomètre d’images Amnis ImageStreamX (AniRA-Cytométrie),
Logiciel de video tracking (AniRA-PBES),
Micro-CT Scan Phoenix Nanotom S (AniRA-ImmOs),
MiniSpec LF90II, physiocages et sondes télémétriques (AniPhy).

<hr>Service de transgénèse du plateau de biologie expérimentale de la souris (AniRA-PBES). © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Récupération et rinçage d'embryons de souris après fécondation in vitro au plateau AniRA-PBES. © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Cytomètre de flux en images (ImagestreamX) du plateau technique AniRA-Cytométrie © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Cytomètre de flux du plateau technique AniRA-Cytométrie. © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Cytomètre de masse haut débit pour l'analyse quantitative de cellules uniques (AniRA-Cytométrie). © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Trieur de cellules FACS ARIA II sous hotte au plateau technique AniRA-Cytométrie. © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Changement de litière des souris (placées en système de confinement) sous isolateur en zone sécurisée de niveau 3 à l’animalerie AniRA-PBES. © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Isolateur en zone sécurisée de niveau 3 à l’animalerie AniRA-PBES. © P. Delapierre, Inserm.

<hr>Lecteur Elisa/Luminex pour les dosages de cytokines réalisés par la plateforme AniRA-ImmOs.

Comment soumettre un projet ?

Rapprochez-vous du plateau AniRA concerné par votre demande, afin de présenter votre projet, choisir l’approche technologique la mieux adaptée, évaluer les coûts et les délais de réalisation. En plus des prestations techniques, AniRA assure également des activités de formation pour ses utilisateurs et dans le cadre de la formation continue (CNRS, ENS Lyon, Inserm, Université Claude Bernard Lyon 1). Si votre demande concerne le département AniRA-Mouse models, contactez l’une des plateformes suivantes : AniRA-PBES, AniRA-AGC, AniRA-Vectorologie, AniRA-BSL3. Si votre demande concerne le département AniRA-Phenotyping, contactez l’une des plateformes suivantes : AniRA-Cytométrie, AniRA-ImmOs, AniPhy, NeuroChem.

Exemple d'utilisation

Développement d'un nouveau protocole pour une édition simple et efficace du génome

En association avec des chercheurs de Lyon et de Grenoble, le service de transgénèse du plateau AniRA-PBES a développé un protocole amélioré pour l'édition du génome par CRISPR-Cas9 chez la souris. La procédure consiste en l'électroporation de zygotes intacts avec un complexe de ribonucléoprotéines (RNP) préparé à partir de la nucléase Cas9 recombinante et d'un ARN guide synthétique (duplex crRNA:tracrRNA).

Cette méthode simple, sans clonage, s’avère très efficace pour générer des indels et petites délétions par jonction d'extrémités non homologues (NHEJ) ou des mutations ponctuelles spécifiques par recombinaison homologue (HDR). La procédure évite la construction d’ADN, la transcription in vitro et la microinjection d’ovocytes, simplifiant grandement l’édition du génome chez la souris. Ce protocole est un service actuellement proposé par le plateau AniRA-PBES. Une trentaine de nouveaux modèles murins ont été réalisé en utilisant la technologie CRISPR-Cas9.

Pour en savoir plus : Teixeira M. et al. (2018). Electroporation of mice zygotes with dual guide RNA/Cas9 complexes for simple and efficient cloning-free genome editing. Scientific Report, 8(1):474.