ARPEGE

Caractérisation sur cellules des effets pharmacologiques de drogues et de la signalisation de cibles membranaires à l’aide de sondes luminescentes.

Site de la plateforme

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Caractérisation sur cellules des effets pharmacologiques de drogues et de la signalisation de cibles membranaires à l’aide de sondes luminescentes.

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La plateforme ARPEGE est spécialisée en pharmacologie, criblage et interactomique. Elle met à disposition des scientifiques des compétences et des équipements dédiés au criblage à moyen débit de petites chimiothèques (récepteurs membranaires et canaux ioniques), à l’analyse du mode d'action des composés et à la caractérisation fonctionnelle à moyen débit de protéines cibles (récepteurs et autres).

ARPEGE offre également la possibilité d’analyser les voies de transduction du signal des récepteurs et de caractériser des interactions entre protéines. L’ensemble de ces méthodes mettent en œuvre des sondes fluorescentes (Fluo4 pour le calcium), des techniques de transfert d’énergie (FRET, BRET et TR-FRET) et des approches label free (xCELLigence).

Expertises et services

Prestation en accès libre : formation des utilisateurs aux techniques et équipements proposés par la plateforme, accompagnement pour les études de faisabilité, la réalisation d’expérimentations et l’analyse des résultats,
Prestation de réalisation : prise en charge intégrale de projets avec production d’un fichier de données et d’un rapport de résultats à l’issue de la prestation.

Moyens et équipements

6 luminomètres dédiés aux techniques de luminescence et transfert d’énergie (BRET, FRET, TR-FRET, HTRF), format d’analyse 96 et 384 puits,
Equipement label free pour les mesures de variation d’impédance, format 3 x 16 puits,
Robot de pipetage pour dilutions sérielles et distribution, équipé d’un bras avec tête 8 canaux indépendants et tête 96 canaux, format de transfert 96 et 384 puits.

<hr>Equipement pour lecture de luminescence.

<hr>Microplaque 96 puits pour mesure de luminescence.

<hr>Préparation de cellules sous une hotte à flux laminaire.

<hr>Réaction de bioluminescence avec émission de lumière dans le bleu.

<hr>Fluorescence avec émission de lumière dans le vert.

Comment soumettre un projet ?

Pour soumettre un projet à ARPEGE, prenez rendez-vous avec l’équipe de la plateforme par téléphone ou par mail à l’adresse damien.maurel@igf.cnrs.fr.

Pour les prestations en accès libre, vous recevrez après inscription des codes d'accès au site de réservation des équipements. Avant toute expérimentation, vous devrez suivre une formation individuelle. Le personnel de la plateforme vous fournira les tutoriels et les outils (consommables, plasmides…) nécessaires à vos expérimentations. La facturation se fera tous les trimestres selon le temps d’occupation des machines et les réactifs utilisés.

Pour les prestations de réalisation, un contrat décrivant le projet et les modalités de réalisation sera établi, donnant lieu à la signature d’un devis. Les projets sont réalisés par ordre d’arrivée. Un rapport comportant une mise en forme des données brutes est envoyé à l’issue de toute expérimentation et la facturation se fait sur bon de commande.

Exemple d'utilisation

Criblage de molécules avec des effets agonistes biaisés sur le récepteur mu-opioïde

La plateforme ARPEGE a été sollicitée par une équipe de recherche académique pour caractériser l’action d’une petite série de molécules actives sur le récepteur mu-opioïde dans le but d’identifier des ligands présentant une action agoniste biaisée. Ce type de ligand active sélectivement certaines voies de signalisation des récepteurs, en bloquant les autres voies.

L’action des molécules étudiées a été analysée sur onze voies de signalisation du récepteur mu-opioïde. ARPEGE a travaillé sur des cellules HEK293 transfectées de façon transitoire avec des plasmides codant pour le récepteur mu-opioïde humain et pour les senseurs de signalisation. Les expérimentations ont été réalisées au format microplaque 96 puits. Un nouveau type de composé présentant les effets agonistes biaisés recherchés a été identifié, ouvrant des pistes dans la mise au point de médicaments avec moins d’effets secondaires.