Baculovirus et thérapie (BACFLY)

Production de protéines recombinantes innovantes dans le système d’expression baculovirus/cellules d’insecte.

Site de la plateforme

Baculovirus et thérapie (BACFLY)

Production de protéines recombinantes innovantes dans le système d’expression baculovirus/cellules d’insecte.

Site de la plateforme

Baculovirus et thérapie (BACFLY)

Plateforme de l’UMS Biocampus Montpellier, BACFLY est une structure dédiée à la production de protéines recombinantes innovantes pour toute étude in vitro et in vivo. La technologie Flexibac brevetée par la plateforme utilise le système d'expression baculovirus/cellules d’insecte pour générer, en une seule étape, 100% de baculovirus multirecombinants, coexprimant entre une et six protéines. Elle offre également la possibilité d’exprimer des glycoprotéines avec différents variants de glycosylation, de la glycosylation « insecte » (paucimannose) à la glycosylation « mammifère » (glycanes à structure biantennée sialylée).

BACFLY étudie les interactions entre baculovirus et cellules d’insecte pour optimiser la production de protéines simples ou complexes (anticorps...) et les modifications post-traductionnelles des protéines recombinantes (sécrétion, glycosylation…). La plateforme propose des prestations de service et des projets de collaboration aux laboratoires académiques ou privés, au niveau régional, national et international. Elle valorise aussi ses résultats de recherche par des publications dans des revues scientifiques ou des brevets dans le domaine de la thérapie et du diagnostic humain.

Expertises et services

Expression de protéines simples mais difficiles à exprimer : GPCR, canaux ioniques, protéines lysosomales,
Expression de protéines complexes et de complexes protéiques (baculovirus coexprimant entre 1 et 6 protéines) : anticorps monospécifiques, molécules dérivées d’anticorps, particules pseudovirales (VLP), complexes multienzymatiques,
Expression des variants de glycosylation de protéines simples, complexes ou de complexes protéiques (de la glycosylation « insecte » à la glycosylation « mammifère »),
Expression de pseudotypes de baculovirus pour la transduction de cellules de mammifères et variants de glycosylation,
Purification de protéines étiquetées ou d'anticorps produits dans le système d’expression baculovirus/cellules d’insecte,
Formation, conseil et expertise en expression de protéines recombinantes,
Recherche et développement sur le système d’expression baculovirus/cellules d’insecte (PCT/FR2017/052191, PCT/FR2018/052652) et sur le format d’anticorps spécifiques (PCT/IB2012/053482).

Moyens et équipements

Laboratoire de bactériologie : hotte bactériologique, centrifugeuse réfrigérée, 2 congélateurs à 80°C, 2 bains-marie avec agitateurs,
Laboratoire L1 de culture cellulaire : 2 hottes à flux laminaire, 2 étuves réfrigérées,
Laboratoire de biologie moléculaire : ultracentrifugeuse, 2 systèmes PCR, four à hybridation,
Laboratoire L1 de virologie : 2 hottes à flux laminaire, étuve réfrigérée, chambre froide à 4°C pour le stockage des virus recombinants, microscope photonique inversé, microscope à fluorescence droit,
Laboratoire de biochimie : 2 sorbonnes, spectrophotomètre, lecteur ELISA,
Laboratoire L1 de production de protéines recombinantes : salle blanche de 40 m², 3 hottes à flux laminaire, 2 cytoculteurs de 2L et 5L, étuve à 28°C avec agitateurs, armoire à rollers, 3 hottes à flux laminaires, centrifugeuse réfrigérée, compteur cellulaire, microscope photonique inversé,
Laboratoire de purification de protéines recombinantes : 2 systèmes de purification par chromatographie, hotte à flux laminaire.

<hr>Locaux de la plateforme BACFLY à Saint-Christol-lez-Alès.

<hr>Observation en microscopie électronique de l’étalement d’une molécule d’ADN de baculovirus.

<hr>Culture de cellules d’insecte sous agitation à 28°C.

<hr>Observation en microscopie électronique d’une coupe de cellule infectée : détail d’un polyèdre avec des particules de baculovirus.

<hr>Infection de cellules d’insecte en roller par des baculovirus pour la production de protéines recombinantes.

<hr>Migration sur gel d’agarose d’ADN de baculovirus recombinant après digestion par une enzyme de restriction et coloration au BET.

<hr>Reconstruction 3D d’images de microscopie électronique de la sécrétion de VLP recombinantes à la surface de cellules d’insecte.

<hr>Purification par chromatographie sur colonne d’une protéine recombinante.

<hr>Nouveau système de purification par chromatographie sur colonne financé par IBiSA.

<hr>Analyse en PAGE après purification d’un anticorps bispécifique (1), d’un fragment d’anticorps Fab’2 (2), d’un anticorps IgG3 (3), d’un anticorps bispécifique non concentré (4) et concentré (5) et d’une protéine taguée (6).

<hr>Observation au microscope de cellules d’insecte infectées par un baculovirus recombinant.

<hr>Observation au microscope de la sécrétion de VLP recombinantes produites grâce au système baculovirus/cellules d’insecte.

<hr>Observation en microscopie électronique de VLP recombinantes sécrétées par des cellules infectées par un virus recombinant.

Comment soumettre un projet ?

La plateforme BACFLY est ouverte aux chercheurs académiques et aux entreprises. Pour soumettre un projet, vous devez télécharger un questionnaire sur le site de la plateforme et le renvoyer rempli à muriel.roth@cnrs.fr. Une réunion ou un entretien vous sera ensuite proposé afin d’établir un cahier des charges pour votre projet.

Les projets sont sélectionnés par le comité scientifique de la plateforme selon leur faisabilité et la disponibilité de l’équipe. La plupart des projets sont traités sous la forme de collaborations impliquant l’expertise complémentaire de chercheurs et ingénieurs de différents domaines.

Exemple d'utilisation

Etude du mécanisme d’action d’un anticorps

La plateforme BACFLY a été sollicitée par un laboratoire académique appartenant au LabEx MAbImprove pour participer à l’étude du mécanisme d’action d’un anticorps. L’équipe demandeuse avait isolé un anticorps murin spécifique issu d’un hybridome de souris, présentant un potentiel thérapeutique intéressant.

Les ingénieurs de BACFLY ont utilisé leur technologie Flexibac pour produire dans le système d’expression baculovirus/cellules d’insecte plusieurs formes de cet anticorps : une forme recombinante et un isotype différent pour pouvoir moduler ses fonctions effectrices in vivo. Plusieurs variants ont également été produits : des mutants de la région constante Fc et des variants de glycosylation. Les différentes versions de l’anticorps ont été produites et purifiées puis étudiées in vitro et in vivo par l’équipe demandeuse.