AniRA

Un large éventail de services spécialisés dédié à la souris : génération et maintien de lignées murines génétiquement modifiées, développement de modèles physiopathologiques infectieux ou à microbiote contrôlé, et analyse phénotypique extensive.

Site de la plateforme

AniRA

Site de la plateforme

Ani-Rhône-Alpes (AniRA)

La plateforme AniRA met à disposition de la communauté scientifique une expertise unique autour du modèle murin, allant de la création de lignées génétiquement modifiées jusqu’à leur caractérisation phénotypique approfondie. AniRA s’organise en deux départements complémentaires.

Le département AniRA-Mouse models accompagne les chercheurs dans la création, la production et le maintien de souris génétiquement modifiées. Il s’appuie sur une animalerie hautement équipée, intégrant les technologies d’édition du génome les plus récentes, comme CRISPR-Cas9. Il permet le développement de modèles précliniques de pathologies variées ou de maladies infectieuses, dans lesquels le microbiote peut aussi être contrôlé pour étudier son impact. Des animaleries de confinement A1, A2 et A3, ainsi qu’un laboratoire BSL3-I3 pour la manipulation des pathogènes de niveau 3 et des insectes vecteurs offrent un environnement sécurisé pour l’étude des microbes pathogènes, des pathologies infectieuses et des nouvelles thérapies.

Le département AniRA-Phenotyping propose quant à lui une large gamme d’équipements de pointe et des capacités d’exploration pour analyser en profondeur les fonctions biologiques en conditions homéostatiques, pathologiques et infectieuses. Ses expertises couvrent l’immunologie, le métabolisme cellulaire, les domaines métaboliques et cardiovasculaires, les neurosciences, ainsi que l’étude des mécanismes liés aux syndromes d’ischémie-reperfusion. Pour cela, il s’appuie sur des plateaux de pointe, notamment en cytométrie, dotées d’équipements de dernière génération et d’un savoir-faire reconnu.

En combinant ces deux pôles, AniRA offre un cadre intégré et sécurisé pour la mise au point de modèles innovants et leur exploration fonctionnelle, au service de la recherche biomédicale et translationnelle.

Expertises et services

Génération et maintien de lignées murines génétiquement modifiées (AniRA-PBES) :

Elevage et production de lignées murines EOPS,
Création de lignées mutantes par transgénèse, recombinaison, lentigénèse et technologies d’édition du génome de type CRISPR-Cas9,
Mise à disposition de lignées, laboratoires et équipements pour l’utilisation d'animaux à des fins scientifiques en zones de confinement de niveau A1, A2, A3, axénique ou gnotobiotique,
Décontamination de lignées par transfert aseptique d’embryons,
Cryopréservation de lignées (embryons, sperme, ovaires) et distribution.

Analyse génétique et vectorologie (AniRA-AGC, AniRA-Vectorologie) :

Génotypage par PCR,
Quantification des acides nucléiques par PCR quantitative et PCR digitale multiplexée,
Production de vecteurs rétro et lentiviraux pour cellules et transgénèse.

Réalisation de protocoles expérimentaux (AniRA-PBES, AniRA-BSL3) en milieu confiné et création de modèles préclinique (AniRA-PBES, AniRA-PlexMico, AniRA-BSL3) :

Réalisation de protocoles expérimentaux infectieux en milieu confiné de niveau 1 à 3,
Développement de nouveaux modèles de maladies infectieuses,
Développement de modèles murins humanisés pour l'étude de pathogènes humains,
Analyse des interactions des virus émergents avec leur vecteur (moustique) et leur hôte (animal et Homme),
Développement de modèles murins à flore contrôlé.

Phénotypage du système immunitaire et imagerie in toto (AniRA-ImmOs, AniRA-Cytométrie) :

Immunophénotypage par cytométrie en flux,
Utilisation de modèles physiopathologiques animaux validés,
Développement de tests multiparamétriques innovants,
Mise à disposition de matériel : Seahorse XF, ELISpot, Luminex et imageur in toto en BSL-2,
Formation à la cytométrie en flux et à l’immunophénotypage.

Phénotypage métabolique, cardiovasculaire, et neurotransmetteurs (AniRA-AniPhy, AniRA-BELIV, AniRA-Ixplora) :

Analyses du métabolisme et du système cardiovasculaire,
Etude du système nerveux autonome et musculaire,
Etude de neurotransmetteurs via des biocapteurs à microélectrodes implantables pour détecter et quantifier les substances neurochimiques (oxygène, glucose, lactate, glutamate, choline, D-sérine),
Etude des principaux phénotypes cardiaques et physiopathologie des syndromes d’ischémie-reperfusion (cœur, rein et cerveau).

Formation des professionnels et étudiants :

Formation des utilisateurs de la plateforme et dans le cadre de la formation continue (CNRS, ENS Lyon, Inserm, Université Claude Bernard Lyon 1),
Participation au DIU Formation réglementaire destinée aux personnels concevant des procédures expérimentales à l'Université Claude Bernard Lyon 1,
Contribution à la production de guides pour l’expérimentation à des fins scientifiques et sur le bien-être animal.

Moyens et équipements

Zones d’expérimentation A1, A2, A3, et en gnotobiologie (AniRA-PBES),
Zone d’expérimentation L3 pour pathogènes et insectes vecteurs (AniRA-BSL3),
Luminex MAGPIX Bio-Plex (AniRA-ImmOs),
ELISpot IRIS Mabtech (AniRA-ImmOs),
Seahorse XFe8, XFe24 et XFe96 (AniRA-ImmOs),
Cytomètres en flux conventionnels et spectraux en BSL1 et BSL2 (AniRA-Cytométrie),
Cytomètre d’image Amnis ImageStreamX (AniRA-Cytométrie),
Logiciel de video tracking (AniRA-PBES),
Micro-CT Scan Phoenix Nanotom S (AniRA-ImmOs),
Minispec LF90II, mq-20 et mq-60 (AniPhy),
Physiocages et sondes télémétriques (AniPhy),
Locotronic (AniPhy).

<hr>Service de transgénèse du plateau de biologie expérimentale de la souris (AniRA-PBES). © Inserm, P. Delapierre.

<hr>Récupération et rinçage d'embryons de souris après fécondation in vitro (AniRA-PBES). © Inserm, P. Delapierre.

<hr>Cytomètre de flux en images ImageStreamX (AniRA-Cytométrie). © Inserm, P. Delapierre.

<hr>Cytomètre en flux (AniRA-Cytométrie). © Inserm, P. Delapierre.

<hr>Changement de la litière de souris sous isolateur en zone sécurisée de niveau 3 (AniRA-PBES). © Inserm, P. Delapierre.

<hr>Isolateur en zone sécurisée de niveau 3 (AniRA-PBES). © Inserm, P. Delapierre.

<hr>Lecteur Elisa Luminex pour les dosages de cytokines (AniRA-ImmOs).

<hr>Lecteur ELISpot et FluoroSpot pour l’évaluation des réponses immunitaires au niveau cellulaire (AniRA-ImmOs). © Inserm, V. Moncorgé.

<hr>Accès règlementé à la zone expérimentale en milieu confiné A2 et gnotobiotique (AniRA-PlexMico, AniRA-PBES). © Inserm, V. Moncorgé.

<hr>Laveurs de cages de zone expérimentale en milieu confiné (AniRA-PlexMico, AniRA-PBES). © Inserm, V. Moncorgé.

Comment soumettre un projet ?

Vous pouvez contacter la plateforme AniRA par mail à l'adresse anira-pilotage@ens-lyon.fr ou directement l'un de ses services : AniRA-PBES, AniRA-AGC, AniRA-Vectorologie, AniRA-BSL3, AniRA-Cytométrie, AniRA-ImmOs, AniRA-AniPhy, AniRA-BELIV, AniRA-Ixplora.

Dès réception de votre demande, une étude de faisabilité sera réalisée. Lors de cette phase préparatoire, vous vous réunirez avec le service concerné pour préciser les ressources nécessaires, établir un calendrier et convenir des modalités de suivi, en adéquation avec la complexité du protocole et des prestations attendues. Le projet sera ensuite accompagné par des échanges réguliers, depuis la mise en œuvre jusqu’à la restitution finale des résultats et le bilan.

Exemple de projet

Développement d'un nouveau protocole pour une édition simple et efficace du génome

En association avec des chercheurs de Lyon et de Grenoble, le service de transgénèse du plateau AniRA-PBES a développé un protocole amélioré pour l'édition du génome par CRISPR-Cas9 chez la souris. La procédure consiste en l'électroporation de zygotes intacts avec un complexe de ribonucléoprotéines (RNP) préparé à partir de la nucléase Cas9 recombinante et d'un ARN guide synthétique (duplex crRNA:tracrRNA).

Cette méthode simple, sans clonage, s’avère très efficace pour générer des indels et petites délétions par jonction d'extrémités non homologues (NHEJ) ou des mutations ponctuelles spécifiques par recombinaison homologue (HDR). La procédure évite la construction d’ADN, la transcription in vitro et la microinjection d’ovocytes, simplifiant grandement l’édition du génome chez la souris. Ce protocole est un service actuellement proposé par le plateau AniRA-PBES. Une trentaine de nouveaux modèles murins ont été réalisé en utilisant la technologie CRISPR-Cas9.

Pour en savoir plus : Laubreton D. et al. (2023). Generation of a C57BL/6J mouse strain expressing the CD45.1 epitope to improve hematopoietic stem cell engraftment and adoptive cell transfer experiments. Lab Animal, 52(12):324-331.