KISSf

Criblage enzymatique de composés chimiques inhibiteurs, caractérisation de leur bioactivité sur des cibles thérapeutiques, les protéines kinases, décryptage des interactions moléculaires et des mécanismes d’inhibition.

Site de la plateforme

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La plateforme de criblage d'inhibiteurs KISSf offre un service d'évaluation à moyen-débit de la bioactivité de composés chimiques. Elle utilise un panel de protéines kinases pour réaliser ses analyses et tester les propriétés thérapeutiques de molécules d'intérêt. Ses travaux orientés biologie-santé ont pour objectif de faire émerger de futurs candidats médicaments. Elle a mis en évidence de nombreux composés impliqués dans des mécanismes cellulaires clés, comme la mitose ou la mort cellulaire régulée (apoptotique et nécrotique).

Ainsi, KISSf a pour mission de produire de nouvelles cibles kinases et de développer des tests enzymatiques ou d’interaction pour réaliser des campagnes de criblage moléculaire. La plateforme bénéficie d’une expertise en expression et purification automatisée de protéines recombinantes produites en cellules d’insecte.

Les méthodes de criblage enzymatique utilisées par KISSf reposent principalement sur la technique bioluminescente ADP-Glo (Promega), qui permet de doser l’ATP consommé lors de réactions enzymatiques. Pour la mesure d’affinité (K_d) et le criblage d’interactions moléculaires, la plateforme utilise la technologie microscale thermophoresis (MST, NanoTemper), qui permet de mesurer les changements de mobilité de molécules dans des gradients de température microscopiques et de détecter leurs changements de taille, de charge et d'hydratation. Des développements sont en cours pour envisager des méthodes alternatives ou complémentaires.

Expertises et services

Criblage enzymatique sur cibles kinases : criblage primaire (panel de base ou à façon), détermination de concentrations inhibitrices médianes (IC₅₀),
Criblage d’interactions moléculaires : mesure primaire d’affinité, détermination de constantes d’interaction (K_d),
Développement de nouvelles cibles et de différentes méthodes de mesure d’interactions,
Mise à disposition d’équipements, formation des utilisateurs et planification.

Moyens et équipements

Equipements utilisés et mis à disposition œuvre :

Chaîne de robots de distribution PerkinElmer Janus Expanded et Janus Mini (2014),
Lecteur Envision avec upgrade PerkinElmer (Filtre et TR-FRET, monochromateur et stacker, Ultralumi),
Monolith Nt115 et label-free,
Chaîne de purification de protéines recombinantes AKTA Start avec caisson froid GE HeathCare,
Robot Nimbus et PSM Hamilton,
IncuCyte S3 Essen Bio et Sartorius.

Cibles kinases à disposition par famille :

GMGC : Hs_CDK5/p25, Hs_CDK9/CyclinT, Mm_CLK1, Rn_DYRK1A, Hs_GSK3α, Hs_GSK3β, Ssc_GSK3α/β,
CAMK : Hs_PIM1, Hs_PIM2,
CK1 : Hs_CK1ε, Ssc_CK1δ/ε, Lm_CK1,
TK : Hs_ABL1, Hs_EGFR, Hs_JAK3, Hs_Tyk2, Hs_VEGFR2, Hs_c-MET, Hs_FGFR,
Autres : Hs_NEK6, Hs_NEK7,
Homo sapiens (Hs), Sus scrofa domesticus (Ssc), Leishmania major (Lm), Mus musculus (Mm), Rattus norvegicus (Rn).

Collections de composés chimiques purifiés :

Collection académique de l'Université Claude Bernard Lyon 1 (3 600 composés),
Collections commerciales : Prestwick chemical library(1 300 composés dont 99% de principes actifs médicamenteux génériques), Enzo Biochem SCREEN-WELL Natural product library (502 composés).

<hr>Unité de préparation de solutions de composés pour l’évaluation de leur bioactivité (solubilisation en DMSO).

<hr>Système automatisé de purification de cibles kinases
AKTA Start.

<hr>Stéphane Bach, responsable scientifique de KISSf.

<hr>Thomas Robert, responsable technique de KISSf.

<hr>Une analyse phénotypique sur cellules de mammifères en culture est envisageable sur demande.

<hr>Détermination d’une valeur Z’ préalable à la mise en place d’un nouveau test de criblage à haut débit.

Comment soumettre un projet ?

Mise à disposition d’équipements, formation, projet de financement collaboratif, prestation... Pour soumettre un projet à la plateforme KISSf, envoyez un mail à l’adresse kissf@sb-roscof.fr. Les demandes seront ensuite contractualisées à partir d’un formulaire électronique à remplir.

Les laboratoires académiques européens qui demandent une mise à disposition d’équipements et de moyen à la plateforme KISSf, peuvent bénéficier d’un service d’hébergement proposé par la Station biologique de Roscoff pour toute la durée du séjour. La demande s’effectue via le portail d’entrée du réseau d’infrastructure du Centre national de ressources biologiques marines (EMBRC).

Exemple d'utilisation

Développement d'inhibiteurs sélectifs de protéines kinases

Dans une étude dirigée par Florence Mongin à l'Institut des sciences chimiques de Rennes (ISCR), la plateforme KISSf a évalué la bioactivité de composés hétérocycliques de synthèse sur les isoformes alpha et beta de la kinase GSK-3. Cette évaluation a permis la réalisation d'une étude croisée de type SAR (relation structure-activité), qui a conduit à l'identification de molécules leads ayant une sélectivité significative pour l'isoforme alpha de GSK-3. Ce composé s'est ensuite montré d'intérêt pour le traitement du glioblastome lorsqu’il est associé à l'utilisation de temozolomide.

Pour en savoir plus : Hasyeoui M. et al. (2023). Oxazolo[5,4–f]quinoxaline-type selective inhibitors of glycogen synthase kinase-3α (GSK-3α): Development and impact on temozolomide treatment of glioblastoma cells. Bioorganic Chemistry, 134:106456.

Contact

KISSf
Station biologique de Roscoff
Place Georges Teissier, CS 90074
29688 Roscoff
Région : Bretagne+33 (0)2 98 29 23 39
kissf@sb-roscoff.fr
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