Plateforme de microscopie électronique de Tours (PFME-Tours)

Une expertise unique en microscopie électronique sur des échantillons variés : tissus, cellules, particules en suspension et macromolécules.

Site de la plateforme

Plateforme de microscopie électronique de Tours (PFME-Tours)

Une expertise unique en microscopie électronique sur des échantillons variés : tissus, cellules, particules en suspension et macromolécules.

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Plateforme de microscopie électronique de Tours (PFME-Tours)

La plateforme PFME-Tours offre aux équipes de recherche en biologie-santé et science des matériaux une large palette de techniques d’imagerie en microscopie, électronique à transmission, électronique à balayage et confocale (super-résolution). Les équipes utilisatrices ayant bénéficié d’une aide technique de la plateforme ont publié près d’une centaine d’articles dans des revues internationales entre 2014 et 2018.

La plateforme a également vocation à former les jeunes chercheurs à ces différents types de microscopies. Elle organise des formations théoriques et pratiques pour des doctorants, ainsi que des ateliers de démonstration autour des différents instruments.

La spécificité de PFME-Tours provient de son expertise en microscopie électronique, acquise pendant près de 40 années de fonctionnement en service commun. Elle est complétée par un équipement performant et un savoir-faire en microscopie photonique, notamment confocale.

Expertises et services

Microscopie électronique à transmission (MET, cryo-MET) :

Préparation d’échantillons biologiques, y compris par des cryo-méthodes : cryo-ultramicrotomie, congélation haute pression, cryo-substitution,
Analyse ultrastructurale de cellules et tissus,
Immunomarquages de cellules et tissus (immunogold),
Reconstruction 3D à partir de coupes sériées, tomographie.

Microscopie électronique à balayage (MEB, cryo-MEB) :

Préparation d’échantillons,
Imagerie de surface sous haute et basse tension (MEB-FEG).

Imagerie d'objets micro ou nanométriques en MEB et MET :

Analyse de bactéries, virus, liposomes, macromolécules, ADN et nanoparticules.

Microanalyse X par EDS en MEB et MET :

Analyse locale et cartographie élémentaire.

Imagerie par microscopie à épifluorescence et confocale à balayage laser (CLSM) :

Localisation d’éléments cellulaires marqués (protéines virales, facteurs de signalisation…) en 3D par microscopie confocale,
Acquisition confocale sur cellules vivantes (time-lapse),
Reconstruction des volumes et quantification de la colocalisation de marqueurs à partir d’acquisitions en microscopie confocale,
Imagerie par durée de vie de fluorescence (FLIM).

Moyens et équipements

Microscope électronique à transmission JEOL JEM-1400 Plus (120 kV) :

Porte-objet cryo-Fischione (Model 2550),
Module STEM, détecteur BF/DF,
Détecteur EDS Oxford,
Camera CMOS GATAN OneView,
Module de tomographie électronique, analyse d’images (GATAN Latitude).

Microscope électronique à transmission JEOL JEM-1011 (100 kV) :

Camera CMOS GATAN Rio 9.

Microscope électronique à balayage à effet de champ Zeiss ULTRA Plus :

Sonde d’analyse EDS (détecteur SDD) et logiciels SAMx,
Système de cryo-préparation et cryo-transfert GATAN ALTO 2500.

Equipements pour la préparation des échantillons :

Ultramicrotomes LEICA Ultracut UCT et UC7,
Cryo-ultramicrotome LEICA EM UC7/FC7,
Système de congélation haute pression (HPF) LEICA ICE,
Appareil de cryo-substitution LEICA EM AFS,
Station de congélation LEICA EM CPC,
Métaliseur GATAN Precision etching coating system (PECS),
Evaporateur SPI VacuPrep II,
Station d’effluvage (glow discharge) CORDOUAN Elmo.

Microscope confocal à balayage laser haute résolution LEICA SP8 gSTED :

Objectifs : 40x (NA=1.30) HC PL APO OIL, 63x (NA=1.40) HC PL APO OIL et 100x (NA=1.40) HC PL APO OIL STED WHITE,
Sources laser : WLL (laser blanc, jusqu’à 8 longueurs d’ondes accordables entre 470 et 670 nm), UV 405 nm et Ar 488, 514 nm (+ 458, 476 et 496 nm),
Détecteurs : 2 PMT, 1 HyD (hybride, haute sensibilité),
Système d’acquisition en FLIM (courant 2019), module FRAP,
Système à super-résolution gated-STED (2D), laser de déplétion 660 nm,
Enceinte thermostatée avec régulation du CO₂ (acquisition sur cellules vivantes),
Station de traitement d’images (LAS-X v2.0, Imaris v9.3, déconvolution SVI Huygens).

<hr>Réalisation de coupes ultrafines pour MET sur couteau diamant à l’ultramicrotome.

<hr>Ecran phosphorescent de MET lors de l'observation d'une coupe.

<hr>Cils de l’épithélium respiratoire observés en MET dans une coupe ultrafine.

$<hr>Défaut de structure d’un cheveu (fracture) observé au MEB.$ <hr>Biofilm bactérien observé au MEB.

<hr>Microcristaux en « roses de sable » observés au MEB.

<hr>Visualisation au MEB du bourgeonnement de particules virales du VIH à la surface d’une cellule.

<hr>Squelettes minéraux de microalgues issues d’un prélèvement d’eau de mer observés au MEB.

<hr>Adénovirus observés au MET en coloration négative.

<hr>Immunomarquage à l’or colloïdal (immunogold) en MET sur cryo-coupes (méthode selon Tokuyasu).

<hr>Visualisation au MET du bourgeonnement de particules virales du VIH à la surface d’une cellule (coupes ultrafines).

<hr>Virus de la varicelle observé au MET dans une section ultrafine.

<hr>Population de bactériophages observée au MET (coloration négative à l’acétate d’uranyle).

Comment soumettre un projet ?

Pour soumettre un projet à PFME-Tours, utilisez le formulaire en ligne sur le site de la plateforme. Vous serez rapidement informé de la possibilité de prise en charge de vos analyses et dans le cas d’une réponse positive, vous recevrez un devis et un délai d’exécution.

Exemple d'utilisation

Observation du virus de l’hépatite C par microscopie électronique

Grâce à la plateforme PFME-Tours, une équipe de l’Inserm et de l’Université de Tours (U1259) est parvenue à observer, pour la première fois, le virus de l’hépatite C (VHC) par microscopie électronique, établissant en octobre 2016 une première mondiale. L’article sur ces travaux, publié dans la revue Gut, a eu un fort retentissement médiatique (télévision, radio, presse écrite) et de multiples relais dans les réseaux sociaux. La cellule communication de l’Inserm a estimé à 15 millions le nombre de français potentiellement exposés à cette information.

Ce travail a mis fin à 25 ans de mystère sur la morphologie du VHC, dont la particularité est d’être associé à des lipides. Deux jeunes chercheurs de l’U1259, Jean-Christophe Meunier et Eric Piver, ont travaillé avec Julien Burlaud-Gaillard, ingénieur de la plateforme, pour mettre au point une technique d’immunocapture des particules virales, permettant de les isoler sans les dénaturer et de les visualiser par microscopie électronique à transmission.

Pour en savoir plus : Piver E. et al. (2017). Ultrastructural organisation of HCV from the bloodstream of infected patients revealed by electron microscopy after specific immunocapture. Gut, 66(8):1487-1495.

Contact

PFME-Tours
Faculté de médecine
Université de Tours
10 boulevard Tonnellé
37032 Tours
Région : Centre-Val de Loire+33 (0)2 34 37 96 92
roingeard@med.univ-tours.fr
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