PRIMACEN

Synthèse peptidique, localisation et détermination de l'activité biologique de molécules d'intérêt par imagerie cellulaire, criblage et transcriptomique.

Site de la plateforme

PRIMACEN

Synthèse peptidique, localisation et détermination de l'activité biologique de molécules d'intérêt par imagerie cellulaire, criblage et transcriptomique.

Site de la plateforme

Plateforme de recherche en imagerie cellulaire de Normandie (PRIMACEN)

La plateforme PRIMACEN regroupe quatre services : synthèse peptidique et criblage fonctionnel, bioimagerie photonique, microscopie électronique à transmission, microdissection et qPCR. Elle offre ainsi un continuum, depuis la synthèse de biomarqueurs et la préparation d’échantillons jusqu’à la localisation et la détermination de l’activité biologique de molécules d’intérêt.

PRIMACEN dispose d’équipements pour la synthèse, la purification et la caractérisation par spectrométrie de masse de peptides et d’analogues peptidiques. La plateforme propose également les équipements nécessaires à la préparation de cellules (culture) et de tissus (coupes, tranches, microdissection) d’origine variée (bactérienne, végétale, animale ou humaine), fixés ou vivants, et destinés notamment à l’imagerie. Un large spectre de résolutions multidimensionnelles est accessible grâce à la microscopie photonique, la macroscopie photonique et la microscopie électronique à transmission. PRIMACEN offre aussi la possibilité de déterminer l’activité biologique de molécules d’intérêt via des méthodes de criblage à moyen débit (bioessais) et la quantification de l'expression relative de gènes grâce à des analyses transcriptomiques (qPCR).

PRIMACEN s’investit par ailleurs dans le développement d'applications informatisées en support aux structures académiques et dans de nombreux domaines : communication, gestion de publications, livrables, patrimoines immobiliers, inventaires, congrès...

Expertises et services

Développement d’outils pharmacologiques, thérapeutiques et diagnostiques,
Etude de la signalisation, prolifération et apoptose cellulaire par bioessais,
Imagerie de fluorescence à haute et super résolution spatiale et temporelle,
Traitement et analyse d’images : déconvolution et modélisation multidimensionnelle,
Microscopie électronique à transmission et cryo-méthodes,
Microdissection laser couplée à l'analyse d’expression par PCR en temps réel à haut débit,
Développement d’applications informatisées.

Moyens et équipements

Synthèse peptidique et criblage fonctionnel :

3 synthétiseurs de peptides,
4 HPLC,
2 spectromètres de masse MALDI-TOF,
2 lecteurs de plaques : Flexstation 3 et Victor V.

Bioimagerie photonique :

Microscope confocal droit à platine fixe SP8 MP (Leica) avec laser pulsé infrarouge Chameleon (Coherent),
Microscope confocal inversé gCW STED SP5 X avec laser blanc (Leica),
Macroscope confocal et champ large LSI (Leica),
Vidéomicroscopes : TIRF (Leica), Biostation (Nikon), Cell Discoverer 7 (Zeiss),
Systèmes de microscopie à champ large, fond clair et sombre, à épifluorescence (Nikon),
Système de microscopie Axioscope 7 (Zeiss),
Macroscope fond clair et fond sombre (Leica),
Systèmes complets d’analyse d’images Imaris (Bitplane) et de déconvolution Huygens Professional (SVI),
Laboratoires L2 animal et végétal.

Microscopie électronique :

Cryo-fixateur à haute pression HPM100 (Leica),
Automate de cryo-substitution AFS2 (Leica),
Ultramicrotome UC6 et cryo-ultramicrotome UC7 (Leica),
Microscope électronique à transmission Tecnai 12 (FEI).

Microdissection laser et qPCR :

3 cryo-microtomes CM3050 et CM1950 (Leica), NX70 (Microm, Thermo Scientific),
2 vibratomes VT1000 (Leica),
2 microdissecteurs (Leica, PALM Zeiss),
3 appareils de PCR quantitative (qPCR) et PCR digitale,
1 robot Bravo (Agilent).

<hr>Localisation de l’actine, de la tubuline et du noyau de cellules de phéochromocytome (PC12) par microscopie à champ large.

<hr>Station de microscopie à champ large automatisée CD7 (Zeiss). Service de bioimagerie photonique.

<hr>Système de microscopie confocale et biphotonique (TCS SP8 Leica et Chameleon Coherent). Service de bioimagerie photonique.

<hr>Système de microscopie confocale et nanoscopie STED (TCS SP5 X Leica Microsystems). Service de bioimagerie photonique.

<hr>Réseau de tubuline dans des cellules de phéochromocytome (PC12) observé par nanoscopie STED.

<hr>Station d’analyse d’images Imaris (Bitplane). Service de bioimagerie photonique.

<hr>Imagerie des vaisseaux sanguins (vert) et lymphatiques (bleu) dans le cœur par microscopie confocale.

<hr>Appareil d’ultra-cryomicrotomie UC7 (Leica Microsystems). Service de microscopie électronique à transmission.

<hr>Appareil de cryo-fixation à haute pression HPM100 (Leica Microsystems). Service de microscopie électronique à transmission.

<hr>Tissus conducteurs au sein d’une feuille de pommier observés par microscopie électronique à transmission.

<hr>Appareil de PCR en temps réel à haut débit QuantStudio Flex 12K (Thermo Scientific). Service de microdissection laser et qPCR.

<hr>Appareil de microdissection laser (PALM Zeiss), statif inversé, laser diode UV. Service de microdissection laser et qPCR.

<hr>Tranche organotypique de cortex cérébral de souris (P2), microdissection de zones marquées avec l’isolectine TRITC.

<hr>Lecteur de microplaques robotisé Flexstation 3 (Molecular Devices). Service de synthèse peptidique et criblage fonctionnel.

<hr>Spectromètre de masse MALDI-TOF/TOF (UltrafleXtreme, Bruker). Service de synthèse peptidique et criblage fonctionnel.

<hr>Synthétiseur de peptide (micro-ondes) sur phase solide (Liberty, CEM). Service de synthèse peptidique et criblage fonctionnel.

Comment soumettre un projet ?

Vous pouvez adresser une demande d’accès au service de la plateforme concerné à partir du site internet de PRIMACEN, en choisissant parmi les modalités proposées : utilisation autonome, collaboration scientifique ou prestation. Le responsable de service s’engage à traiter votre demande sous 15 jours. Il étudiera la faisabilité de votre projet en tenant compte de son intérêt scientifique, mais aussi de la disponibilité des ressources humaines et matérielles sur la plateforme. Il définira en particulier un mode d’accès aux postes de travail selon la nature de la demande, la durée et les exigences techniques du projet, la disponibilité du service ou de ses acteurs, les priorités en matière de R&D définies en conseil de gestion, les compétences techniques et l’appartenance administrative du demandeur.

Le responsable de service vous informera de la faisabilité de votre projet puis formalisera dans un cahier des charges les conditions de sa réalisation. La demande sera effective après acceptation du cahier des charges proposé et du règlement intérieur du service concerné.

Exemple d'utilisation

Conception du premier antagoniste du récepteur du neuropeptide 26RFa

Le neuropeptide 26RFa est impliqué dans le contrôle de la prise alimentaire, de la reproduction et de l’ostéogenèse. Les laboratoires DCN2 et COBRA à Rouen, le CERM à Caen et l’Institut de recherche Servier à Croissy-sur-Seine se sont associés pour réaliser des études de relation structure/activité, afin de produire des agonistes et antagonistes du récepteur de 26RFa. La synthèse peptidique des analogues, l’expression, la localisation cellulaire et le criblage fonctionnel des récepteurs ont été réalisées sur la plateforme PRIMACEN.

Les analogues h26RFa, 26RFa_(19-26) et 26RFa_(20-26) ont été synthétisés en phase solide, purifiés par HPLC en phase inverse et caractérisés par spectrométrie de masse MALDI-TOF. Les récepteurs natif (hGPR103) ou muté (Q125AhGPR103) ont été exprimés dans la lignée CHO-G_α16 et localisés par microscopie confocale. La réponse fonctionnelle des récepteurs a été déterminée par l’augmentation de la concentration cytosolique de calcium grâce à un lecteur de microplaque. Cette étude a permis de montrer une interaction fonctionnelle entre l’Arg²⁵ du 26RFa et la Gln¹²⁵du GPR103/QRFPR qui a été mise à profit dans la conception du premier antagoniste de ce système, le LV-2185.

Pour en savoir plus : Neveu C. et al. (2014). Molecular basis of agonist docking in a human GPR103 homology model by site-directed mutagenesis and structure-activity relationship studies. British Journal of Pharmacology, 2014, 171(19):4425-4439.

Contact

PRIMACEN
Centre universitaire de recherche et d’innovation en biologie (CURIB)
25 rue Tesnière
76821 Mont-Saint-Aignan
Région : Normandie+33 (0)2 35 14 70 48
contact@primacen.fr
Site de la plateforme