Réseau d'histologie expérimentale de Montpellier (RHEM)

Le RHEM est une plateforme multisites créée en 2008 avec une expertise et un savoir-faire en histopathologie des tissus issus de modèles animaux représentatifs de maladies humaines. Sa mission est de révéler, quantifier et interpréter les structures tissulaires. Le RHEM intervient dans le domaine de la recherche préclinique pour mieux comprendre les mécanismes physiopathologiques des maladies, évaluer l’innocuité et l’efficacité de nouvelles thérapies et identifier de nouvelles cibles pathogéniques ou thérapeutiques.

Le RHEM propose une expertise scientifique en amont des expérimentations, au cours des analyses ou lors de l’interprétation des résultats. Il dispense des conseils et des formations en histologie expérimentale et en immunohistologie. Il développe également des technologies pour mieux caractériser les modèles issus des recherches, et constitue une biobanque de blocs de tissus expérimentaux sains et pathologiques provenant de modèles précliniques. Son expertise scientifique et technique s’intègre dans une démarche qualité attestée par les certifications ISO 9001 et NF X50-900.

Expertises et services

Analyse histopathologique sur échantillons fixés :

• Inclusion en paraffine de tissus et d’organes,
• Production de coupes sériées, pointillées, sériées/sériées, séries/pointillées, multiblocs,
• Réalisation de colorations classiques (hématoxyline-éosine, hématoxyline-éosine-safran) ou spéciales (PAS, bleu alcian, trichrome de Masson, rouge sirius, Perls…),
• Réalisation d’immunomarquages chromogéniques ou fluorescents, simplex ou multiplex, marqueurs de prolifération, d’apoptose, de cellules immunitaires, voies de signalisation…
• Réalisation d’hybridations in situ chromogéniques ou fluorescentes (sonde Alu),
• Production de blocs TMA (tissue microarrays) à partir de blocs de chercheurs ou du RHEM,
• Obtention de lames virtuelles à l’aide d’un scanner de lames en collaboration avec la plateforme Montpellier ressources imagerie (MRI),
• Analyse lésionnelle par un pathologiste vétérinaire.

Reconstruction 3D d’échantillons par transparisation :

• Transparisation de tissus et d’organes (technique X-Clarity),
• Réalisation d’immunomarquages in toto.

Formation en histologie expérimentale et immunohistologie :  

• Fixation par perfusion intracardiaque,
• Prélèvement d'organes,
• Cryoconservation et enrobage en paraffine,
• Préparation de coupes au cryostat, microtome ou vibratome,
• Réalisation de colorations,
• Immunomarquage en peroxydase et fluorescence,
• Transparisation par la technique X-Clarity et immunomarquage in toto.

Moyens et équipements

• Automate d’imprégnation en paraffine, 2 stations d’enrobage en paraffine, 2 flashfreezes, 2 snapfrosts et tissue micro-arrayer, 
• 7 microtomes, 6 cryostats et vibratome,
• Imprimante de lames et 3 imprimantes de cassettes,
• Automate de coloration et colleuse de lamelles,
• 2 modules de démasquage, automate d'immunomarquage et d’hybridation in situ et 2 fours d’hybridation pour la technique RNAscope, 
• 3 microscopes à fond clair et lumière polarisée avec caméra, 
• Système de polymérisation X-Clarity. 

Comment soumettre un projet ?

Le RHEM est ouvert à toutes les équipes de recherche, qu’elles soient académiques ou privées. Pour soumettre un projet, vous pouvez envoyer un mail à la responsable technique de la plateforme, Nelly Pirot, en décrivant votre projet et vos besoins. Une personne du RHEM vous recontactera pour étudier avec vous la faisabilité du projet, la meilleure stratégie de prise en charge de vos échantillons et la nature des services qui peuvent vous être offerts.

Exemple de projet

Etude du rôle d’E4F1 dans l'homéostasie cutanée

L’équipe de Laurent Le Cam à l’Institut de recherche en cancérologie de Montpellier (IRCM) s'intéresse à la dérégulation de circuits moléculaires impliqués dans le vieillissement et la tumorigenèse. Elle travaille notamment sur la caractérisation des nouveaux mécanismes de régulation du réseau p53 (P53, E4F1, MDM2), voie clé de la suppression de tumeurs.

Les chercheurs utilisent des souris génétiquement modifiées, obtenues par la technologie Cre/Lox-P. La caractérisation de ces modèles animaux a nécessité des analyses histologiques détaillées. Le RHEM assure le traitement de routine de ces tissus : inclusion, coupe, coloration et immunomarquage. Depuis 2014, environ 1 970 échantillons de tissus et près de 1 750 lames provenant de la quinzaine de modèles différents détenus par l’équipe ont été analysés. La production de TMA (tissue microarrays) a permis d’accélérer l'analyse de ces modèles animaux et de réduire les coûts associés.

Ainsi, le RHEM est associé à un résultat démontrant que la perte d’expression du facteur de transcription E4F1 dans les kératinocytes entraîne des défauts de l'épiderme et l'épuisement de la niche de cellules souches épidermiques.

Pour en savoir plus : Goguet-Rubio P. et al. (2016). E4F1-mediated control of pyruvate dehydrogenase activity is essential for skin homeostasis. PNAS, 2016, 113(39):11004-9.

Contact

RHEM
BioCampus Montpellier
141 rue de la Cardonille
34094 Montpellier Cedex 5
Région : Occitanie+33 (0)4 11 28 31 38
nelly.pirot@inserm.fr
Site de la plateforme

THÉMATIQUES : Histologie, anatomopathologie

RESPONSABLES SCIENTIFIQUES :
Florence Bernex

RESPONSABLES TECHNIQUES :
Nelly Pirot

RESPONSABLES QUALITÉ :
Yohan-Jean Noël

CERTIFICATIONS :

TUTELLES : CNRS, Inserm, Université de Montpellier

LABELLISATION IBiSA : 2014

MOTS CLÉS : Histopathologie expérimentale, Modèles animaux de maladie humaine, Phénotypage histologique, Microscopie virtuelle, Biobanque expérimentale, Immunomarquage, Analyse anatomopathologique, Multiplex, Hybridation in situ, Tissue microarray, TMA, Blocs de paraffine, Lames histologiques, Transparisation, Reconstruction 3D, Analyse lésionnelle, Formation en histologie, Formation en immunohistochimie et immunofluorescence, Technique du RITA, Lames virtuelles.

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