ARIADNE

Criblage de librairies chimiques à haut débit et haut contenu, biologie quantitative et quantification des paramètres ADME.

Site de la plateforme

ARIADNE

Criblage de librairies chimiques à haut débit et haut contenu, biologie quantitative et quantification des paramètres ADME.

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ARIADNE

ARIADNE regroupe deux plateformes, ARIADNE-Criblage et ARIADNE-ADME, travaillant de manière indépendante mais complémentaire. Elles ont pour mission de découvrir des petites molécules chimiques utiles en thérapeutique ou pour explorer le vivant, et de caractériser leurs propriétés ADME.

ARIADNE-Criblage rassemble des expertises et des équipements dédiés au criblage de perturbateurs biologiques tels que des petites molécules chimiques ou des librairies de siRNA. La plateforme est constituée de trois plateaux. Le plateau HTS permet de miniaturiser des essais pharmacologiques cellulaires ou non et de cribler des librairies chimiques à haut débit. Il permet d'évaluer à moyen débit l'activité de séries chimiques en cours d'optimisation et d'explorer leurs mécanismes d'action. Les plateaux HCS-L2 et HCS-L3 permettent de réaliser à haut débit et à haut contenu des criblages par microscopie quantitative dans un environnement sécurisé L2 ou L3.

La plateforme ARIADNE-ADME permet quant à elle de quantifier les paramètres qui caractérisent la capacité des molécules à être absorbées, distribuées, métabolisées et éliminées in vivo (ADME).

Expertises et services

ARIADNE-Criblage :

Mise au point de tests à haut débit miniaturisés et automatisés pour le criblage in vitro, in bacterio ou in cellulo,
Criblage sur cibles (enzymes, interactions protéine-protéine, récepteurs…) ou phénotypique,
Lecture multimode (absorbance, fluorescence, FRET, BRET, polarisation de fluorescence, AlphaScreen…),
Criblage à haut contenu par imagerie automatisée et quantitative,
Criblage en laboratoires de sécurité biologique de niveau 1 à 3,
Criblage de librairies chimiques diversifiées ou focalisées,
Criblage de fragments, criblage de repositionnement,
Criblage de chimiothèques commerciales ou académiques,
Evaluation des effets-doses et calcul d’EC50,
Test de molécules en combinaison,
Suivi d’effets en cinétique,
Mesure de l’engagement de cible par CETSA,
Criblage de siRNA.

ARIADNE-ADME :

Etude de la pharmacocinétique chez les rongeurs : temps de concentration plasmatique maximale, exposition, volume de distribution, clairance, demi-vie d’élimination, biodisponibilité, concentration dans les organes,
Etude des propriétés physico-chimiques : solubilité cinétique, solubilité thermodynamique, lipophilie (LogD) et stabilité chimique,
Etude de la stabilité métabolique : microsomes, plasma, rôle des estérases,
Etude de la distribution : liaison aux protéines plasmatiques,
Etude de la sécurité : détection d’adduits GSH et toxicité in vitro (avec ARIADNE-Criblage),
Bioanalyse par UPLC-MS/MS triple quadrupôle,
Prédiction in silico de la biodisponibilité (pipelines Pilot ou Chemaxon).

Moyens et équipements

ARIADNE-Criblage, HTS :

Nanodistributeur Echo 550 (Labcytes),
Distributeurs de liquide pour plaques CyBi-Well (CyBio) et Zephyr (Caliper),
Lecteurs de plaques multimodes Mithras (Berthold), EnSight et Victor (PerkinElmer),
Lightcycler (Roche) pour expériences de TSA (thermal shift assay).

ARIADNE-Criblage, HCS-L2 :

Plateforme robotique BioCel (Agilent) pour la préparation, l’incubation et la lecture de plaques, avec nanodistributeur Echo 550 (Labcytes), distributeur Bravo (Agilent), lecteur multimode Polarstar (BMG Labtech), incubateur automatisé (LiCONic), microscope confocal InCell 6000 (General Electric), centrifugeuse, laveur, étiqueteuse, lecteur de codes-barres...

ARIADNE-Criblage, HCS-L3 :

Microscope confocal InCell 6500 (Molecular Devices),
Incubateur automatisé (LiCONic),
Lecteur multimode de plaques EnSight (PerkinElmer).

ARIADNE-ADME :

Chaîne UPLC Acquity I-Class (Waters) couplée à un triple quadrupôle Xevo TQD (Waters) équipé d’une source ESI,
Chaîne LC-MS TOF LCT Premier XE (Waters).

<hr>Chimiothèque (ARIADNE-Criblage). © Nikko VP.

<hr>Automate Zephyr sur le plateau HTS (ARIADNE-Criblage).

<hr>Automate CyBio sur le plateau HTS (ARIADNE-Criblage).

<hr>Tête de pipetage (ARIADNE-Criblage). © Nikko VP.

<hr>Lecteur multimode EnSight sur le plateau HTS (ARIADNE-Criblage).

<hr>Nanodistributeur Echo 550 sur le plateau HTS (ARIADNE-Criblage). © Nikko VP.

<hr>Plateau de criblage robotisé HCS-L2 (ARIADNE-Criblage).

<hr>Nanodistributeur Echo 550 sur le plateau de criblage robotisé HCS-L2 (ARIADNE-Criblage).

<hr>Microscope InCell 6000 sur le plateau de criblage robotisé HCS-L2 (ARIADNE-Criblage).

<hr>Incubateur automatisé LiCONic sur le plateau de criblage robotisé HCS-L2 (ARIADNE-Criblage).

<hr>Microscope InCell 6500 sur le plateau de criblage HCS-L3 (ARIADNE-Criblage).

<hr>Chaîne LC-MS TOF LCT Premier XE (ARIADNE-ADME).

<hr>Chaîne UPLC Acquity I-Class couplée à un triple quadrupôle Xevo TQD (ARIADNE-ADME).

Comment soumettre un projet ?

Les demandes destinées à ARIADNE-Criblage et ARIADNE-ADME peuvent être adressées par mail à la responsable scientifique, Florence Leroux. Elles feront l’objet d’une discussion avec le porteur de projet, puis d’une étude de faisabilité. Les projets répondant au cahier des charges seront acceptés dans l'ordre d'arrivée. Selon les cas, le personnel d'ARIADNE-Criblage peut former les utilisateurs pour un accès autonome mais payant à la plateforme, établir des devis pour un service, collaborer à une recherche de financement... Chaque projet est suivi par un membre du comité de pilotage et par le responsable technique. Concernant ARIADNE-ADME, les projets démarrent après acceptation de la proposition de la plateforme, du devis et du planning. Ils sont suivis par le responsable technique.

Exemple d'utilisation

Découverte d’agonistes du récepteur TGR5 à faible perméabilité intestinale

Le récepteur d'acide biliaire TGR5 est une cible thérapeutique prometteuse pour le traitement de plusieurs maladies, dont le diabète de type 2. Après administration in vivo d’agonistes TGR5, des effets indésirables ont cependant été observés et reliés à des actions systémiques à distance de la cellule cible d’intérêt, la cellule L-entéroendocrine qui sécrète du glucagon-like peptide 1 (GLP-1).

En collaboration avec les laboratoires Récepteurs nucléaires, maladies métaboliques et cardiovasculaires (U1011) et Drugs and molecular for living systems (U1177), ARIADNE-Criblage a mis au point un test de criblage cellulaire permettant de mesurer, avec un gène rapporteur, l’activation du récepteur TGR5. Après criblage d’une librairie diversifiée et sélection des hits, ARIADNE-ADME a contribué à l’optimisation chimique des molécules en mesurant leurs propriétés ADME (solubilité, lipophilie, passage membranaire…). La plateforme a en particulier étudié l’impact de la PEGylation sur la pharmacocinétique de ces agonistes de TGR5 chez la souris.

Pour en savoir plus : Hoguet V. et al. (2021). Beyond the rule of 5: Impact of PEGylation with various polymer sizes on pharmacokinetic properties, structure–properties relationships of mPEGylated small agonists of TGR5 receptor. Journal of Medicinal Chemistry, 64(3):1593-1610.